Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Фармацевтика -> Грачева И.М. -> "Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов " -> 30

Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов - Грачева И.М.

Грачева И.М., Грачев Ю.П., Мосичев М.С., Борисенко Е.Г. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов — М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. — 240 c.
Скачать (прямая ссылка): labpraktikumpotehfermentpreparatov1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 24 25 26 27 28 29 < 30 > 31 32 33 34 35 36 .. 69 >> Следующая

Воронку и измерительную часть аппарата заполняют 5%-ным раствором серной кислоты. Серная кислота уменьшает растворимость газов в воде и препятствует размножению водорослей и грибов. Уровень этой жидкости в аппарате устанавливают на нуле. Это достигается закреплением кольца, на котором находится «груша», на постоянной высоте.
Все отверстия для сообщения с воздухом должны быть закрыты ватными пробками.
Рис. 11. Прибор для газометрического определения катализы 5
/ — сосуд для выполнения реакции со стаканчиком для пероксида водорода: 2 — измерительная трубка; 3 — «груша» с раствором серной кислоты; 4 — трубка для облегчения установки уровня
Перед измерением все части аппарата проверяют на герметичность.
* Для определения активности каталазы в толстостенные реакционные баночки, подобранные к прибору, отмеривают по 10 см3 центрифугата, туда же добавляют Ю см3 воды и ставят при помощи пинцета маленький стаканчик с 5 см3 3%-ного раствора пероксида водорода (если концентрация Н2О2 иная, то его наливают в таком объеме, чтобы при разложении пероксида водорода выделилось 68—70 см3 кислорода). Средняя начальная концентрация пероксида водорода в реакционной баночке в общей смеси составит 0,8%.
Горлышко баночки закрывают пробкой с трубкой, соединенной с измерительной бюреткой прибора, устанавливают баночку в баню с температурой 20°С. Проверяют и регулируют уровень жидкости в приборе, закрывают сообщение с воздухом винтовым зажимом и опускают «грушу» в нижнее положение. После этого вращательным движением опрокидывают стаканчик с пероксидом водорода в банке и в этот же момент пускают секундомер. В течение 10 с содержимое банки взбалтывают (вращательным движением). Баночку опять опускают в водяную баню с температурой 20°С. Для предотвращения вспенивания смеси рекомендуется добавлять 1—2 капли толуола.
Количество выделившегося кислорода определяют, поднимая «грушу» до соответствующего уровня за Юс до отсчета. Отсчет делают ровно через 1,3 и 6 мин. После каждого отсчета реакционную смесь перемешивают в течение 10 с.
Титр пероксида водорода может быть определен при помощи прибора непосредственно по объему кислорода, выделившемуся при 30-минутной реакции в присутствии каталазы. Для этого поступают точно так же, как и при определении активности фермента. Чтобы определить, какой объем кислорода может быть получен из взятого количества пероксида водорода, применяют для его разложения масличные семена (льна, подсолнечника и др.)> обладающие высокой активностью каталазы.
Определение активности р-глюкозидазы
Метод основан на гидролизе р-глюкозидазой р-глю-козидных связей амигдалина, линамарина и др. Актив-
ность р-глюкозидазы определяется одновременно с Цианогенной активностью, в качестве субстрата используют раствор амигдалина. В этом случае наиболее удобно активность р-глюкозидазы учитывать по приросту восстанавливающей способности, связанной с отщеплением глюкозы, а дианогенное действие — по накоплению синильной кислоты.
Активность фермента выражают в микромолях глюкозы и синильной кислоты, полученных при действии фермента за 1 ч, на 100 мг белка или в миллиграммах на 1 г взятого для исследования материала.
Необходимые реактивы. 1%-ный раствор амигдалина (в случае учета только р-глюкозидазы применяют раствор арбутина или салицина)—0,57 г глюкозида растворяют в 100 см3 ацетатного буфера с pH 4,7; 10%-ный раствор серной кислоты.
Техника определения. В 2 конические колбы на 100 см3 наливают по 5 см3 раствора глюкозида и по 20 см3 раствора ферментного препарата (ФП). Для контрольных определений используют 2 другие колбы, в которые наливают по 20 см3 раствора ФП. Колбы с растворами нагревают и кипятят с обратным холодила ником в течение 10—15 мин, охлаждают и приливают по 5 см3 раствора глюкозида. Все колбы закрывают резиновыми пробками с укрепленными внутри пикриновыми бумажками и ставят в термостат с температурой 25°С на 4—,18 ч.
Разведение ФП и время действия фермента подбирают так, чтобы в пробе на момент анализа оставалось до 50% глюкозида от взятого исходного вещества. По истечении установленного времени действие фермента приостанавливают прибавлением 2 см3 10%-ного раствора серной кислоты.
Активность цианогенного фермента определяют по изменению окраски пикриновой бумажки, сравнивая1 окраску со стандартной шкалой. По приросту сахара, образующегося в результате гидролиза глюкозида, определяют накопление р-глюкозидазы (сахар определяют полумикрометодом). Разница в содержании сахара между опытными и контрольными пробами получается тем больше, чем выше активность р-глюкозидазы при одних и тех же условиях проведения опыта.
ГЛАВА II
ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ ПО ТЕХНОЛОГИИ ФЕРМЕНТНЫХ препаратов
§ 1, ПОЛУЧЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ПРИ ПОВЕРХНОСТНОМ и ГЛУБИННОМ культивировании микроорганизмов
Лабораторная работа №1
Культивирование микроорганизмов — продуцентов ферментов — поверхностным способом на твердых питательных средах
Микроорганизмы, растущие на твердых средах, в процессе своей жизнедеятельности выделяют во внеш-нюю среду различные гидролитические ферменты. Культура микроорганизма, полученная таким способом, является исходным материалом для получения ферментных препаратов различной степени очистки, а в высушенном состоянии она может быть готовым техническим препаратом.
Предыдущая << 1 .. 24 25 26 27 28 29 < 30 > 31 32 33 34 35 36 .. 69 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама