Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Фармацевтика -> Грачева И.М. -> "Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов " -> 53

Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов - Грачева И.М.

Грачева И.М., Грачев Ю.П., Мосичев М.С., Борисенко Е.Г. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов — М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. — 240 c.
Скачать (прямая ссылка): labpraktikumpotehfermentpreparatov1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 47 48 49 50 51 52 < 53 > 54 55 56 57 58 59 .. 69 >> Следующая

0ошая воспроизводимость разделения. Благодаря этим достоинствам метод применяется для самых разнообразных целей: для испытания чистоты препаратов и хроматографических фракций, оценки методов экстракции, очистки и т. д.
Диск-электрофорез применяется не только для аналитических целей, но и для препаративного разделения, а также в качестве ультрамикроаналитического метода, когда количество вещества измеряется в нано- и пикограммах.
Диск-электрофорез представляет собой метод, в котором используется неоднородная разделяющая система с полиакриламидным гелем в качестве носителя.
Полиакриламидный гель представляет собой продукт сополи-меризации акриламида СН2=СН—СО—NH2 и какого-либо сшивающего агента, чаще всего N'N'-метиленбисакрнламида: СН2—СН— —СО—NH—СНг—NH—СО—СН=СНг. Благодаря образованию поперечных связей между растущими соседними полиакриламидными цепями, возникающими в результате полимеризации винильных групп, такой гель имеет структуру ирехмерной сетки. Вязкость, эластичность и прочность геля зависят как от степени полимеризации, так и от степени сшивци (системы гелей для диск-электрофореза приведены в табл. 8 приложения II).
При диск-электрофорезе используют пары буферов разного состава и с разными значениями pH, а носитель состоит из отдельных слоев геля, различающихся по Размерам пор. Благодаря этому разделяемые вещества концентрируются сначала в очень узкой стартовой зоне, Что имеет решающее значение для четкого разделения смеси.
Высокая разрешающая способность диск-электрофо-Реза базируется на двух физических явлениях: эффекте концентрирования и эффекте молекулярного сита. При Разделении растворимых компонентов смеси веществ эта СМесь сначала концентрируется в узкой полосе крупнолистого полиакриламидного геля, а затем в мелкопо-Рйстом геле ее компоненты распределяются по величи-е’ Форме и заряду молекул.
При диск-электрофорезе обычно пользуются малень-и”Ми колонками полиакриламидного геля, состоящими ля Частей; крупнопористого концентрирующего ге-щ’ в котором происходит концентрирование подлежа-
х Разделению веществ, и мелкопористого разделяю-
щего геля, в котором эти вещества разделяются. В ко .¦ лект установки для диск-электрофореза входят Tat электроды, сосуды для электродов, заполненные буф. ным раствором, и источник питания.
Ионы, движущиеся во время электрофореза в <вд направлении с фракционируемыми веществами и об; ловливающие эффект концентрирования, можно разб.: на два типа: ведущие и замыкающие. В начале ра; ления ведущие ионы находятся во всех частях коло! а замыкающие—только в электродном буфере.
Значения pH буфера и концентрирующего геля бирают так, чтобы ионы по эффективной подвижно располагались в следующем ряду: ведущие ионы, бе,г замыкающие ионы. Так как подвижность белков j колько ниже подвижности ведущих ионов, но выше г: вижности замыкающих ионов, белки концентрирую в узкой зоне, передним фронтом которой служит и. вижная граница. Отдельные белки последовательно ]\ полагаются в колонке между ведущими и замыкаю], ми ионами в соответствии со своей подвижностью, разуя диски толщиной в несколько микрон.
'Когда движущаяся белковая зона, «втиснутая» м. ду ведущими и замыкающими ионами, достигает гра цы между концентрирующим и разделяющим геля-, она встречается с двойным «нарушением непрерыв сти», так как разделяющий гель характеризуется а гими значениями pH и другими размерами пор. Но1 значение pH в разделяющем геле подбирают с rai расчетом, чтобы степень диссоциации замыкают ионов увеличилась во много раз. В результате замык. щие ионы приобретают подвижность, близкую к л вижности ведущих ионов, поэтому они перегоняют б. ки и движутся впереди них непосредственно за ведут ми ионами. При этом происходит изменение злектр!' ского поля, и теперь уже белки движутся в облает постоянной напряженностью поля и с постоянным з" чением pH; здесь они подвергаются истинному зона-ному электрофорезу и разделяются по своим размера форме и электрическому заряду молекул. У белков разной молекулярной массой, даже если они облада’0 одинаковой свободной подвижностью, скорость двн>м ния тоже оказывается различной, и тем самым доС гается их разделение,
Таким образом, сочетание эффекта концентрирования п эффекта молекулярного сита при диск-электрофорезе 0буславливает в конечном счете высокую разрешающую способность этого метода. Из сказанного ясно, что необходимо всегда учитывать влияние величины pH на вещества, подлежащие разделению с помощью диск-электрофореза.
Общий принцип состоит в том, что буферная система должна обеспечивать максимальное разделение веществ, не изменяя ни их растворимость, ни химическую и биологическую устойчивость. Разделяемые вещества при значениях pH концентрирующего и разделяющего гелей должны нести заряд того же знака, что и ведущие и замыкающие ионы. Величина pH ра'створа разделяемых веществ должна быть такой, чтобы при внесении его в колонку заметного изменения pH концентрирующего геля не происходило. Поэтому перед внесением раствора рекомендуется измерять pH и; если необходимо, доводить его до величины pH буфера ±0,75.
Предыдущая << 1 .. 47 48 49 50 51 52 < 53 > 54 55 56 57 58 59 .. 69 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама