Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Физическая химия -> Владимиров А.А. -> "Физико-химические основы фотобиологических процессов " -> 8

Физико-химические основы фотобиологических процессов - Владимиров А.А.

Владимиров А.А., Потапенко А.Я. Физико-химические основы фотобиологических процессов — М.: Высшая школа, 1989. — 200 c.
Скачать (прямая ссылка): fizikobiologicheskogo1989.djv
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 6 7 < 8 > 9 10 11 12 13 14 .. 79 >> Следующая


Сложность спектра поглощения зависит от того, какому числу электронных переходов между разными уровнями соответствует данный спектр. Считается, что каждый электронный переход дает полосу поглощения, которая на графике представлена кривой, близкой к гауссовой кривой нормального распределения.

Количественный спектрофотометрический анализ основан на применении закона Бугера — Ламберта — Бера (1.5) и (1.6). При количественном анализе можно одновременно определять концентрацию нескольких веществ, если спектры их поглощения различаются по форме. Суммарный спектр поглощения смеси нескольких веществ есть простая сумма спектров поглощения компонентов, так как при всех длинах волн оптические плотности компонентов суммируются. Например, для двухкомпонентной

20 D

* -1,6 ~0,8

О

0,8 1,6 D(I) или AB(Z)

Рис. 1.9. Количественный спект- Рис. 1.10. Ошибка определения оптической плот-рофотометрический анализ сме- ности 8DjD при обычной (/) и разностной (2)

смеси при любой длине волны D = D1 +D2, где D1 и D2 — оптические плотности компонентов. Исходя из уравнения (1.10) можно записать

Если молярные коэффициенты поглощения для обоих веществ B1 и B2 известны, равно как и толщина кюветы /, то найти неизвестные концентрации C1 и с2 нельзя, если измерения D проводились при одной длине волны. Для двух разных длин волн получают систему из двух уравнений с двумя неизвестными, решив которую, находят обе концентрации:

Выбранные две длины волны A1 и A2 должны быть такими, для которых молярные коэффициенты поглощения компонентов различаются больше всего; это не всегда соответствует максимумам в спектре поглощения веществ (рис. 1.9). Теоретически, если число длин волн, используемых для измерений, равно числу компонентов, можно проанализировать и более сложные смеси. На практике же редко удается осуществить количественный спектрофотометрический анализ более 2—3 соединений в одной смеси. Критерием правильности анализа может служить совпадение реконструированного спектра, рассчитанного после определения концентраций, по уравнению

си двух веществ: 1, 2—спектры компонентов; 3 спектр смеси

спектрофотометрии

D=Z1C1I^Z1C1L

D(X1) = Z1(X1)C1^Z1 (X1)C1I, D(X1) = Z1(X1)C1^Z1(X1)C1L

D = YjZfiiI

со спектром смеси, измеренным в опыте.

21 При количественном спектрофотометрическом анализе главная задача исследователя — измерить концентрации, а значит, и оптические плотности растворов с большей возможной точностью. Можно показать, что наименьшая погрешность в определении концентрации получается при оптической плотности раствора от 0,2 до 0,8. Для этого примем постоянной абсолютную ошибку при измерении интенсивности света 5/ приемником и найдем минимум функции 5DID= f(D), где 5D — абсолютная, а 5DjD — относительная ошибка при измерении оптической плотности. Согласно уравнению (1.6)

D=Igz0-Ig/- (1.20)

Продифференцировав уравнение (1.20), перейдем к конечным приращениям аргумента 5/ и функции 5D:

SD=0,43435///. (1-21)

Подставив в уравнение (1.21) / из (1.6), получим

5?> = 0,43435//7o10-D, (1.22)

откуда

5?)/?) = 0,43435///o?)10"d. (1-23)

Зависимость 5DjD от D приведена на рис. 1.10, кривая 1. В растворах относительная ошибка в определении оптической плотности растет как при D <0,2, так и при D >0,8. Минимум на кривой можно найти, продифференцировав уравнение (1.23) (он лежит при /) = 0,4343) и приравняв нулю первую производную. Ошибка мало увеличивается в интервале значений D = 0,2—0,8 (T= 15—65%).

Есть несколько способов, позволяющих добиться максимальной точности спектрофотометрического анализа: а) разбавление раствора; б) уменьшение толщины образца; в) подбор длины волны фотометрирования, при которой обеспечивается попадание измеряемых величин оптической плотности в оптимальные пределы.

1.7. Разностная спектрофотометрия

При изучении биологических систем часто необходимо измерить небольшие изменения оптической плотности на фоне сильного поглощения и светорассеяния образца. Это можно сделать двумя способами.

1. Последовательно измеряют спектры поглощения опытного образца D2 = — Ig и образца сравнения D1= -Ig (I1II0), затем

вычитают из первой величины вторую и получают разностный спектр поглощения, т. е. кривую зависимости D2 — D1 от длины волны.

22 2. Непосредственно измеряют разностный спектр поглощения без регистрации интенсивности света, прошедшего через пустую кювету (I0), сравнивают интенсивности света, прошедшего через опытный I2 и контрольный I1 образцы:

AD=-Ig(IJI1).

Метод разностной спектрофотометрии дает возможность определить величину AD с большей точностью, чем при последовательном измерении спектров двух сравниваемых образцов. Выигрыш в точности измерения тем выше, чем больше общая оптическая плотность, т. е. чем меньше отношение ADjD2.

Мерой точности измерения в разностной спектрофотометрии, как и в обычной, служит относительная инструментальная ошибка при определении оптической плотности 5D/D, где 5D — абсолютная ошибка определения, D — оптическая плотность образца. Значение абсолютной ошибки оптической плотности находят, как и при обычной спектрофотометрии, по уравнению (1.22) с той разницей, что вместо I0 следует использовать интенсивность света, прошедшего через образец сравнения I1. Если 5/ не зависит от I, то абсолютная ошибка при определении оптической плотности 5D одинакова при обычной и разностной спектрофотометрии, но относительная ошибка 5DjD при разностной спектрофотометрии значительно ниже, так как в знаменатель входит величина D1 +AD, где AD — измеряемая в разностном спектре оптическая плотность; D1 — фоновая оптическая плотность образца сравнения.
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 6 7 < 8 > 9 10 11 12 13 14 .. 79 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама