Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Физическая химия -> Владимиров А.А. -> "Физико-химические основы фотобиологических процессов " -> 9

Физико-химические основы фотобиологических процессов - Владимиров А.А.

Владимиров А.А., Потапенко А.Я. Физико-химические основы фотобиологических процессов — М.: Высшая школа, 1989. — 200 c.
Скачать (прямая ссылка): fizikobiologicheskogo1989.djv
Предыдущая << 1 .. 3 4 5 6 7 8 < 9 > 10 11 12 13 14 15 .. 79 >> Следующая


На рис. 1.10 (кривая 2) приведен график зависимости 5DjD от AD, из которого видно, что метод разностной спектрофотометрии дает наибольшие преимущества при высокой оптической плотности образца (кривая дана для D1=I) и малых величинах изменения оптической плотности в опытном образце по сравнению с контрольным.

1.8. Искажения спектров в биологических объектах

При измерениях спектров поглощения биологических объектов, таких, как целая ткань или суспензия клеток, могут возникнуть искажения, причиной которых могут быть: а) эффект многократного отражения и рассеяния света на частицах и б) эффект сита (или проскока).

В результате светорассеяния происходит отклонение измеряющего светового пучка от первоначального направления, вследствие чего не весь прошедший свет попадает на фотоприемник. Это приводит к завышению измеряемой оптической плотности. Для борьбы с эффектом светорассеяния используют спектрофотометры, снабженные светоизмерительным шаром (интегрирующей сферой Ульбрихта). В этом случае практически весь рассеянный

23 образцом свет попадает на фотоприемник, и измеряемая оптическая плотность обусловлена только истинным поглощением. В некоторых приборах для борьбы с эффектом светорассеяния сразу за кюветами располагают светорассеивающие пластинки, а фотодетектор максимально приближают к кюветам. Фактически рассеивающая пластинка нивелирует разницу между мутными и прозрачными образцами. Дело в том, что большая часть света, рассеянного частицами в суспензии, направлена вперед и попадает на пластинку. Фотодетектор измеряет свет, рассеянный пластинкой, а не образцом. Таким образом, интенсивность регистрируемого света мало зависит от того, рассеивает образец свет или нет.

Однако далеко не все приборы приспособлены для автоматического учета влияния светорассеяния, в таких случаях вводят поправки. Рассмотрим один из таких методов.

Можно считать поглощение и рассеяние света независимыми процессами, т. е. измеряемая оптическая плотность D есть сумма оптической плотности, обусловленной светорассеянием Dp, и оптической плотности, обусловленной истинным поглощением Dn,

D = Dp + Dn. (1.24)

Чтобы найти Dn=/(A) по уравнению (1.24), нужно знать зависимость Dp от длины волны. Известно, что для суспензии частиц в отсутствие поглощения

/>р = РА", (1.25)

где ? и п — константы, причем в зависимости от формы и размеров частиц п может иметь значения от 0 до 4.

Прологарифмировав уравнение (1.25), получим

Ig Z)p =Ig P-и IgA.,

где IgDp — линейная функция IgA.

Построив график зависимости lgD=/(lgA), можно убедиться, что в длинноволновой области спектра, где поглощение отсутствует (Dn = O), получится прямая линия; экстраполировав ее, можно найти величину IgDp, а следовательно, Dn во всем измеренном спектральном интервале. В заключение рассчитываем Dn = D-Dp и строим истинный спектр поглощения Dn=/(A).

Поглощение света суспензией окрашенных частиц (например, эритроцитов) отличается от поглощения света раствором окрашенного вещества (например, раствором гемоглобина, вышедшего из эритроцитов при гемолизе). Это различие в поглощении объясняют эффектом сита, суть которого поясняется на рис. 1.11, А и Б.

При прохождении пучка света интенсивностью I0 через объект, в котором окрашенное вещество распределено неравномерно,

24 ослабление пучка будет различным в тех местах, где свет проходит через окрашенные частички Ia и I0, и там, где он их минует. Если суммарная площадь сечения частиц равна Sa, а площадь всего образца S, то величина падающего светового потока будет равна I0S, а прошедшего через образец IaSa + I0(S --Sa). Пропускание такого образца равно

г=/А+/о(5~5')=^(г.-1)+1. (1.26)

I0S S

Эту величину полезно сравнить с пропусканием гомогенного раствора такого же количества окрашенного вещества, растворенного во всем объеме объекта SL, где L—толщина объекта

T=IJl0. (1.27)

Количество окрашенного вещества одинаково в обоих случаях и равно

C11SJ=CSL, (1.28)

где са и с—концентрация вещества в частицах и гомогенном растворе соответственно; /—толщина частиц.

Умножив обе части уравнения (1.28) на в, получим

DaSa=D1S, (1.29)

где Da и Dic — оптическая плотность частиц и однородного раствора соответственно.

Оптическая плотность D неоднородного образца может быть рассчитана, если известны отношение Sa/S и одна из величин: Da или Dk. Рассмотрим случай, когда известны оптическая плотность поглощающих частиц Da и относительная площадь, перекрываемая частицами Sa/S. Находим

Ta=IO-flV (1.30)

затем пропускание T по уравнению (1.26) и, наконец, оптическую плотность образца по формуле

D=-IgT. (1.31)

Отношение D/Dk может характеризовать эффект сита; Dk находим по уравнению (1.29). На рис. 1.12 приведены зависимости D/Dk от Da при разных значениях Sa/S, из которого следует, что

25

X1HM

Рис. 1.11. Эффект сита в суспензии эритроцитов: 1 — спектр поглощения суспензии эритроцитов; 2—тот же образец после гемолиза; А — прохождение пучка света через суспензию эритроцитов; Б—через гемолизат Рис. 1.12. Зависимость эффекта сита от неравномерности распределения поглощающего вещества Sa/S и
Предыдущая << 1 .. 3 4 5 6 7 8 < 9 > 10 11 12 13 14 15 .. 79 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама