Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Хроматография -> Алленмарк С. -> "Хроматографическое определение энантиометров " -> 38

Хроматографическое определение энантиометров - Алленмарк С.

Алленмарк С. Хроматографическое определение энантиометров — М.: Мир, 1991. — 268 c.
ISBN 5-03-001889-1
Скачать (прямая ссылка): hromrazdelenentriometr1991.pdf
Предыдущая << 1 .. 32 33 34 35 36 37 < 38 > 39 40 41 42 43 44 .. 87 >> Следующая


В зависимости от заряда сорбата изменение pH подвижной фазы сопровождается увеличением или уменьшением величины к' . во

50

40

3D

20

10

Кислотность

50

40

ЗО

20

10

Буферная сила

рн

5 10 20 50 100 200 500 Концентрация буфера, мМ

0,5 1,0 1,5

Концентрация пропанола -1, %

Рис. 7.10. Удерживание (к') энантиомеров >і-бензоил-р,ь-серина (і), Ы-бензоил-о.г-аланина (2) и М-бензоил-о,1.-фенилаланина (J) в зависимости от pH (а), ионной силы буферного раствора (б) и концентрации органического модификатора (пропанол-1) (в) [90] (с разрешения Elsevier Science Publishers В.V.). Хиральная жидкостная .хроматография

135

В то время как амины и аминокислоты, несущие положительный заряд, более прочно удерживаются при более высоких значениях pH, для отрицательно заряженных сорбатов справедливо обратное. Систематические исследования, проведенные на серии N-бензоил-о, L-аминокислот, позволили глубже понять механизм взаимодействия сорбата с белком. Влияние изменения свойств подвижной фазы на величины к' к а демонстрирует рис. 7.10. Во-первых, удерживание в значительной степени возрастает с усилением гидрофобного характера аминокислоты (Ser > Ala > Phe). Во-вторых, увеличение суммарного отрицательного заряда белка с увеличением pH вызывает уменьшение к' для всех шести соединений (вследствие ионного взаимодействия). Далее, влияние концентрации буфера можно объяснить усилением адсорбции вследствие ионных взаимодействий при низкой ионной силе. Небольшое, но вполне заметное возрастание к' для наиболее сильно удерживаемых сорбатов при высоких концентрациях буфера вероятнее всего является результатом усиления гидрофобных взаимодействий. Поскольку ионные (кулоновские) и гидрофобные взаимодействия по-разному подвержены влиянию ионной силы, то оба эффекта приводят к возникновению минимума в адсорбции сорбата (к' ) в определенной точке. И наконец, совершенно очевидно влияние органического растворителя-модификатора: он всегда приводит к понижению удерживания сорбата и тем сильнее, чем более гидрофобен сорбат. Влияние рH и ионной силы на удерживание незаряженных соединений невелико, но выражено вполне отчетливо. Оно связано исключительно с изменениями в связывающем центре ХНФ. Добавление пропанола-1 вызывает уменьшение удерживания по сравнению с наблюдаемым у заряженных сорбатов, что свидетельствует о преимущественном вкладе в удерживание гидрофобных взаимодействий. Это подтверждает также наблюдаемое очень большое влияние на удерживание длины цепи алканола-1. Высшие спирты являются значительно более эффективными конкурентами за связывающий центр, а потому вызывают более быстрое элюирование сорбата. Возможность регулирования удерживания путем изменения подвижной фазы, которую демонстрирует схема 7.6, говорит о том, что эту особенность данных хроматографических систем можно использовать в целях оптимизации разделения.

На этих колонках могут быть достигнуты очень большие значения а, которые, впрочем, не слишком нужны в практической работе [91, 92]. Однако провести оптимизацию разделения и получить приемлемое время анализа несложно (рис. 7.11). маленькое

РазЗеление: полное частичное нет

Схема 7.6. Оптимизация разделения оптических изомеров путем систематического изменения состава подвижной фазы [227] (с разрешения изд-ва).



10

20 мин О

10

20 мин

Рис, 7.11. Влияние подвижной фазы на разделение; хроматограмма d.i.-кинуренина при pH подвижной фазы 7,1 (а) и 7,6 (б) [54J. Хиральная жидкостная хроматография

137

7.1.4.2. иммобилизованный кислый аггликопротеин

(орозомукоиш

Несмотря на то что белки вызывают большой интерес как потенциальные ХНФ, помимо альбумина в настоящее время исследован еще только один белок — протеин плазмы крови человека, так называемый кислый с^-гликопротеин (АГП) или орозомукоид, присутствующий в плазме в концентрации 55—140 мг на 100 мл. Установлено, что АГП — основной белок в организме человека, способный связывать катионы [93].

Хроматографический сорбент с АГП был получен на основе силикагеля с размером пор 300 A, на котором белок был иммобилизован путем изменения его функциональных групп и последующего сшивания, осуществляемого таким образом, чтобы образовавшиеся агрегаты были достаточно большими и могли удерживаться в порах. АГП содержит пять углеводных фрагментов, на долю которых приходится ~ 45% его молекулярной массы. Окислением периодатом натрия первичные спиртовые группы этих углеводных фрагментов превращаются в альдегидные. Закрепление модифицированного белка на силикагеле проводится путем повышения pH буферного раствора, что вызывает его сшивание через образование оснований Шиффа. Для получения гидролитически устойчивых связей последние восстанавливаются до иминогрупп с помощью циан-борогидрида натрия [94]. Процесс иммобилизации показан на схе- 138

Глава 6

ме 7.7. Колонки с такими сорбентом выпускаются под названием EnantioPac.

Изоэлектрическая точка нативного АГП соответствует 2,7, т. е. примерно на 2 ед. р/ выше, чем у альбумина. Его молекулярная масса составляет 4,1- IO4. Предполагают, что сиаловая кислота (14 остатков на всю молекулу белка), присутствующая в углеводных остатках, ответственна за связывание соединений аммонийного типа в нейтральной области pH [95] и этот процесс протекает с некоторой энантиоселективностью.
Предыдущая << 1 .. 32 33 34 35 36 37 < 38 > 39 40 41 42 43 44 .. 87 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама