Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 2" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 1" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 12" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 11" (Журналы)

Петрянов-соколов И.В. "Научно популярный журнал химия и жизнь выпуск 10" (Журналы)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Хроматография -> Столяров Б.В. -> "Практическая газовая и жидкостная хроматография " -> 146

Практическая газовая и жидкостная хроматография - Столяров Б.В.

Столяров Б.В. Практическая газовая и жидкостная хроматография — С.-Петербург, 1998. — 612 c.
ISBN 5-288-01938-Х
Скачать (прямая ссылка): prakticheskayagazovayaijidkosnaya1998.pdf
Предыдущая << 1 .. 140 141 142 143 144 145 < 146 > 147 148 149 150 151 152 .. 217 >> Следующая


•390 Окрашенные вещества обнаруживаются визуально.

При проведении полуколичественных измерений обученный аналитик может делать оценку с точностью до 10%. С появлением вариантов, гарантирующих достоверность результатов анализа, этот метод детектирования стал использоваться гораздо реже.

Весьма распространенным методом детектирования является опрыскивание пластин окрашивающим реагентом, т. е. использование химических реакций, которые, в принципе, могут проводиться как до, так и после хроматографирования [363, 364, 375]. Некоторые из этих реакций идут на холоду, чаще — требуется нагревание. Обработка хроматограмм химическим реагентом приводит к образованию окрашенных или флуоресцирующих зон, позволяющих обнаружить разделенные компоненты и количественно их оценить. Основное условие при этом, чтобы интенсивность окраски или флуоресценции оставалась стабильной в течение ~30 мин.

Описано и практикуется также добавление реагентов в подвижную или неподвижную фазу (например, использование пластин на основе силикагеля, предварительно обработанного 4%-ным раствором серной кислоты в метаноле). Поскольку все реакции протекают при высокой температуре быстрее, чем при низкой, хроматограмму после обработки химическим реагентом обычно 5-10 мин выдерживают при температуре 100-120°С.

Детектирование может быть универсальным или селективным.

Для первой оценки достигнутого разделения смеси неизвестного состава обычно применяют универсальные реагенты. Наибольшее распространение среди них получили иод (пары иода растворяются в большинстве органических соединений), концентрированная серная кислота (при этом нельзя использовать в качестве неподвижной фазы оксид алюминия вследствие протекания химической реакции), бихромат натрия в серной кислоте (после опрыскивания свободной от растворителя пластины ее недолго нагревают). Далее возможно использование серии реагентов, специфических для определенных групп соединений. Информация об индивидуальном веществе складывается из совокупности результатов различных методов, подтверждающих присутствие данного вещества. В последнее время появилось немало публикаций об использовании ферментативных методов детектирования: для обнаружения биологически активных веществ используют чувствительные к этим веществам микроорганизмы (биоавтография).

•391 В случае неизвестных образцов детектирование начинается с использования физических методов, так как они не разрушают определяемое вещество и позволяют применять независимые варианты детектирования. Они обычно включают поглощение или испускание электромагнитного излучения, регистрируемое фотоумножителем.

После введения Г. Иорком прямой спектрометрической оценки тонкослойных хроматограмм в видимом и УФ-свете был налажен серийный выпуск хроматографических спектрофотометров, позволяющих определять флуоресцирующие и поглощающие ультрафиолетовый свет вещества непосредственно на пластинке в диапазоне длин волн от 200 до 800 нм. Стали возможными регистрация спектров поглощения разделенных соединений с хроматограммы на пластинке и сопоставление полученных результатов со спектрами эталонных веществ. Это также применимо и для in situ спектров ИК [370], рамановских [372] и масс-спектров [371] (см. также обзор [379]).

Для обнаружения радиоактивных веществ используют метод радиоавтографии. На фотографической пленке, прижатой эмульсионным слоем к поверхности хроматограммы, экспонируются участки, соответствующие радиоактивным зонам. Обработав такую хроматограмму, получают фактически точную копию хроматограммы, на которой радиоактивным зонам соответствуют темные пятна. Для детектирования долгоживущих изотопов могут наряду с авторадиографией использоваться детектирование с помощью сцинцилляционной камеры, различные сканирующие методы.

Эмпирически предел детектирования определяется путем нанесения на ТСХ-пластину ряда проб анализируемого вещества с переменной уменьшающейся концентрацией. Отношение сигнал/шум определяют после проведения сканирования. Обычно считается, что предел детектирования достигнут, если это отношение равно 3, т. е. высота пика в 3 раза превосходит амплитуду шума нулевой линии.

Основным параметром, используемым для определения положения пятна на ТСХ-хроматограмме, является коэффициент запаздывания (иногда встречается старое название — параметр удерживания) Rj — отношение расстояния от стартовой линии до центра пятна к расстоянию, пройденному растворителем от стартовой линии до фронта [170]. Для многократного проявления этот параметр рассчитывают по формуле

nRf = I-(I-1Rj)", где 1Rf — параметр удерживания при первом проявлении; п — число проявлений. Значения Rf линейно не соотносятся ни с

•392 факторами, влияющими на хроматографический процесс, ни со структурой разделяемых соединений, но для логарифмической функции от Rf эта линейность наблюдается.

Фактор удерживания к и величина Rf связаны следующим соотношением [385, 386]:

к = (1 - Rf)/Rf.

На воспроизводимость Rf оказывают влияние многие параметры: качество сорбента (с учетом стандартизации адсорбента с известной активностью), толщина слоя, размер образца (Rf не зависит от количества образца, если только не превышена линейная емкость), температура (увеличение температуры окружающего воздуха на 10 °С обусловливает небольшое возрастание Rf за счет испарения растворителя), природа элюента и скорость подвижной фазы (в случае восходящего проявления на величину Rf оказывает влияние наклон пластины), тип проявительной камеры, насыщение камеры парами растворителя, объем вводимой дозы и размер начального пятна, расстояние между начальными зонами, правильное определение фронта растворителя. Элюент надо выбирать таким образом, чтобы значение Rf находилось в интервале от 0,3 до 0,7. Для очень полярных образцов, способных к ионизации, например аминов, кислот, в подвижную фазу добавляют уксусную кислоту или аммиак.
Предыдущая << 1 .. 140 141 142 143 144 145 < 146 > 147 148 149 150 151 152 .. 217 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама