|
Химия природных соединений - Кочетков Н.К.Скачать (прямая ссылка):  Оксипролин содержится только в склеропротеинах и кератинах. Для его выделения Бергман предложил воспользоваться способностьк> пролина и оксипролина давать трудно растворимые соли с родаиилата-ми. Пролин осаждается анилинроданилатом, оксипролин — аммоний-роданилатом, который называется солью Рейнеке. ^ СООН H H (NH2C6H6)2 Cr (SCN)4 [(NH3)2Cr (SCN)4JNH4 анилиироданилат аммонииреинекат Глава З ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА БЕЛКОВ Первой задачей при определении строения природных полипептидов н белков является установление их аминокислотного состава. Основным методом для этого и сейчас служит гидролиз. Его можно 'проводить тремя способами: обработкой белка іили полипептида кислотой, щелочью или ферментами. Из этих трех возможных методов самым распространенным является кислотный гидролиз Выбор последнего обусловлен тем, что кислоты по сравнению со щелочами вызывают меньшее число побочных процессов, а в сравнении с ферментами проводят гидролиз более полно. Чаще всего пользуются 8N серной кислотой или 20%-ной соляной кислотой. В процессе кислотного гидролиза ряд аминокислот подвергается вторичным реакциям. Так, некоторые из аминокислот дезаминируются, распадаясь до оксикислота и аммиака (гидролитическое дезаминирование) R-CH-COOH---------> R—CH—COOH+NH3 I I NH2 ОН или образуют кетокислоту и аммиак (окислительное дезаминирование). R—CH—СООН —------- RCOCOOH+NH3 I NH2 Полностью разрушается триптофан (и частично тирозин), образуя окрашенные в темно-коричневый цвет вещества, получившие общее название гуминов или меланинов. Недавно было показано, что триптофан реагирует при этом аминной группой и азотом индольного кольца с карбонильной группой альдегида или кетокислоты с последующим отщеплением углекислоты и дегидрированием, образуя так называемые граманы. -CH2-CH-COOH /V____-CHi-CH-COOH -CO2 О NH2 ^/\/ И NH с N NH \ / \ С / /\ I-CH2-CH2 У/\/ N4 у NH В основном такое разложение обусловливают углеводы, примеси металлов и образующиеся побочно альдегиды. Частично при кислотном гидролизе разрушается и тирозин. Щелочной гидролиз применяется значительно реже, так как он вызывает рацем.изацию аминокислот, а также интенсивное разложение некоторых из них. В условиях щелочного гидролиза разрушаются цистин и аргинин и їв значительной степени серин и треонин. Цистин в мягких условиях превращается в лантионин. CH2-CH-COOH CH2-CH-COOH S NH2 I S NH2 I I CH2-CH-COOH OH' NH2 S NH2 I I CH2-CH-COOH Аргинин образует в слабых растворах щелочей цитруллин, в концентрированных ¦ ¦орнитин. NH2NH2 CO + NH2 I (CH2)3 I CH-NH2 I COOH орннтнн NH NH2 ч/ с I NH I (CH2)3 I CH-NH2 COOH аргнннн NH3 + NH2 I CO I NH I (CH2)3 I CH-NH2 I COOH цнтруллин Оксиаминокислоты и цистеин расщепляются до аммиака и кето-кислоты (см. выше). Наряду с этим наблюдается также реакция альдольного разуплотнения, при которой разрывается С—С связь с образованием альдегида и глйцина. Из серина образуются формальдегид и глицин, из треонина — ацетальдегид и глицин. CH3CH-CH-CooH- I I ОН NH2 CH„COH+NH2CH2COCH Все эти процессы еще более свойственны пептидам, чем самим аминокислотам. Такое поведение аминокислот во время гидролиза имеет исключительное значение, поскольку в результате распада 'наблюдается не только разложение аминокислоты, но и превращение ее в другую. Если при этом образуется аминокислота, обычно не обнаруживаемая в белках (например, орнитин или лантионин), то легко установить, что она является артефактом. Более серьезным недостатком метода является образование аминокислот, входящих в состав белка, например, глицина, так как с*но может привести к ошибочным заключениям. Существенным моментом при проведении полного гидролиза белков является определение его конца. Обычно конец гидролиза устанавливают по прекращению нарастания аминного азота (определяемого методом ван Сляйка) и выражают его в процентах от количества общего азота. Эта величина не достигает 100%, если белок содержит аминокислоты, в которых азот находится не только в виде а-аминного, например, содержит аргинин, гистидин, пролин и т. д. *<70 Гидролиз белков ферментами пищеварительного тракта применяется главным образом для Проведения неполного ступенчатого расщепления. Полученный тем или иным способом гидролизат содержит смесь аминокислот и аммиак, образовавшийся їв -результате расщепления аспарагина и глутамина и частичного дезаминирования пептидов и аминокислот. После предварительного удаления основной массы кислоты или щелочи гидролизат подвергают фракционному разделению на аминокислоты. В течение первых двух десятилетий текущего столетия аминокислоты разделяли в виде их эфиров, которые подвергали перегонке в вакууме (метод Э. Фишера). Позднее этот метод потерял свое значение из-за сложности выполнения и необходимости применения большого количества белка. В настоящее время благодаря !появлению метода газовой хроматографии, применение эфиров аминокислот, возможно, вновь окажется (интересным.
Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены. |
|
|||||||||||||||||||||||||
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||
