Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Органическая химия -> Кочетков Н.К. -> "Химия природных соединений" -> 169

Химия природных соединений - Кочетков Н.К.

Кочетков Н.К., Торгов И.В., Ботвиник М.М. Химия природных соединений — К.: Наука, 1960. — 561 c.
Скачать (прямая ссылка): himiyaprirodnihsoedineniy1960.djvu
Предыдущая << 1 .. 163 164 165 166 167 168 < 169 > 170 171 172 173 174 175 .. 203 >> Следующая


Разработанные впоследствии колориметрические методы определения аминокислот сильно продвинули наши сведения об аминокислотном составе белков. Ho и для осуществления этими методами требовалось много времени и значительное количество вещества.

Только благодаря появившимся в начале 40-х годов новым методам, вопрос об определении аминокислотного состава получил свое полное и окончательное разрешение. В настоящее время основными способами такого определения являются следующие: 1) распределительная хроматография; 2) ионофорез; 3) электрохроматография; 4) ионообменная хроматография и 5) противоточное распределение. Последним методом пользуются главным образом при разделении пелткдов. Метод распределительной хроматографии на бумаге, разработанный в 1941 г. Гордоном, Мартином и Синджем, положил начало новой эры в развитии химии белка.

Принцип распределительной хроматографии основан на различии в коэффициентах распределения аминокислот между водой и органическим растворителем. Особенность метода распределительной хроматографии на бумаге по сравнению с обычной экстракцией аминокислот из водного раствора органическим растворителем заключается в том, что одну из фаз, чаще всего (водную, помещают на какой-нибудь инертный твердый носитель, а органический растворитель — подвижная фаза,— проходя через первую, !извлекает и распределяет аминокислоты на бумаге в соответствии с их (Коэффициентами распределения. Положение аминокислот на бумаге определяют по отношению скорости движения аминокислоты к скорости движения фронта растворителя и обозначают Rf. Величина Rf зависит в первую очередь от строения аминокислоты, затем от системы растворителей, pH среды и сорта бумаги, Чем полярнеє аминокислота, тем меньше она растворяется в органических растворителях и тем меньше ее Rf. Увеличение длины углеродной цепи повышает п . Введение в молекулу полярных групп,' например, гидроксильной, аминной или карбоксильной понижает Rf Так, Rf фенилаланина в системе фенол/вода = 0,85, а тирозині 0,51. Другие примеры изменения Rf в зависимости от строения аминокислоты представлены на рис. 3 и 4. Подбирая соответствующие смеси растворителей, можно провести достаточно тонкое разделение аминокислот. Наиболее часто пользуются для такого разделения системами: вода — фенол — аммиак; вода—^бутанол — уксусная кислота; бута-нол — аммиак — коллидин и т. д. Разделение можно проводить на одномерной или двумерной хроматограммах. Можно пользоваться также различными типами распределительной хроматографии на бумаге — нисходящей, восходящей и радиальной. Величины Rf для каждой из систем растворителей оказываются постоянными при соблюдении

479
Рис. 3. Зависимость распределения аминокислот на двумерной хроматограмме от

их строения.

а — гомологический ряд, б — введение ОН-группы;--амидироваиие, в — декарбокси-

лирование, г — фосфорилирование;----перемещение NH2.

постоянных условий хроматографирования. На рис. 4 приводится карта распределения аминокислот при двумерной хроматограмме. Проявле иие аминокислот проводят чаще всего обработкой хроматограммы раствором нингидрина. Большинство аминокислот окрашивается при этом в фиолетовый цвет разного оттенка. Пролин образует пятно желтого цвета. Аминокислоты, содержащие другие группы, кроме аминной и карбоксильной, можно обнаружить пользуясь специфическими красочными реакциями, описанными ранее. Количественное определение аминокислот можно проводить непосредственно на бумаге и определять содержание аминокислоты по интенсивности окраски, или фотометрии пятна. Лучшие результаты получают вымыванием аминокислоты и колориметрированием полученного раствора после обработки его нингидрином. Для этого проводят несколько хроматографических разделений смеси аминокислот, одну из хроматограмм проявляют, определяя таким путем положение аминокислот на хроматограмме. Можно также просматривать некоторые аминокислоты в ультрафиолетовом свете.

Важное изменение в хроматографирование аминокислот внесли Штейн и Мур, которые предложили проводить разделение аминокислот на колонке, заполненной бумажным порошком или крахмалом. Через колонку пропускают сначала раствор аминокислот, а затем разделяют их вымыванием смесью растворителей, собирая раствор с помощью специального автоматического коллектора в серию пробирок. Затем колориметрируют растворы с нингидрином. Этот метод оказался особенно удобным для тонкого разделения аминокислот, а

480
0.8

A3--V Г-----------^--------°-?-----°-?______0^L

о,г

AL

0.8

0,7

О.В

O1S

0,4

07-

OS-

0.S-

04

• леиц (f изал • грал

_ мет

\mpun

і тир

Фенол-HH1

3Z

I

3Z

о

а

CJ

W

т;

I



о

CJ-

%

(7.J

• прол

о ала

'0,3

0,2

0,1

9 т

*гис

лизш о

орн

ф окшпрол т глдт NHz

о вксилиз

• тре

^глац

' шсер

тглут о асе

аспШі ф

О цистеин -SOiH

лантионин _________ J ^

0.2

OJ

0,9 0,8 0,7 0,6 0,S 0,4 0.3 О,Z 0,Г

Рис 4. Карта распределения аминокислот на двумерной хроматограмме
Предыдущая << 1 .. 163 164 165 166 167 168 < 169 > 170 171 172 173 174 175 .. 203 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама