|
Химия природных соединений - Кочетков Н.К.Скачать (прямая ссылка):  также для разделения аминокислот в препаративных целях. Особенно продуктивно проведение такого определения, если воспользоваться для этого ионообменными смолами. Разделение аминокислот на ионообменниках основано на способности аминокислот образовывать соли с кислотами и щелочами. Подбирая соответствующие катиониты или аниониты, можно быстро и с успехом разделить гидролизат белка, пользуясь для этого 2,5—3,5 мг белка. Ионообменную хроматографию хорошо сочетать с элюционным или вытеснительным анализом. Myp и Штейн пользуются для этого катионитной смолой сульфополистирольного типа Дауэкс-50, через колонку которого пропускают аминокислоты; последние вымывают затем соответствующими буферными растворами. Для разделения достаточно 3 мг аминокислот. Ионофоретический метод разделения аминокислот также базируется на их амфотерности. При различных pH раствора аминокислоты движутся к катоду или аноду, в соответствии с их изоэлектрическими точками и электрофоретической подвижностью Так при pH, близком к б, кислые аминокислоты направляются к аноду, основные к катоду, а нейтральные остаются неподвижными. Ионофорез также можно проводить в растворе или на твердом носителе. Первый метод позволяет разделять аминокислоты только на сравнительно крупные фракции — кислую, основную и нейтральную. Второй метод, так же как и распределительная хроматография на бумаге, дает возможность разделять любые аминокислоты. В качестве твердого носителя применялись силикагель, крахмал и бумага. Из них самым простым оказался ионо- Зі XjfMHH природных соединений 481 форез на бумаге. Все же при сложных смесях иногда оказывается целесообразным предварительно разделить исходную смесь на ряд фракций. Недостатком метода ионофореза являются процессы диффузии и электроэндосмоса, благодаря которым зоны разделения оказываются менее четкими. Применение высоковольтного ионофореза с напряжением на электродах от 1500 до 3000 в ускоряет процесс. Особенно широко используется он при разделении пептидов. В последнее время разделение проводят еще более тонко, сочетая одновременно распределительную хроматографию и ионофорез. В некоторых случаях полезно бывает перевести аминокислоты в какие-либо производные, которые легче разделяются ил,и легче затем определяются, например в динитрофенильные производные, окрашенные в желтый цвет, или производные, содержащие радиоактивный атом, чаще всего иод или серу. Благодаря этим новым методам, разработанным очень детально, определение аминокислотного состава белка не является уже трудноразрешимой проблемой. Определение точного аминокислотного состава является первичным обязательным моментом при изучении строения молекулы белка. Без такого определения прежде всего оказалось бы невозможным установление последовательности аминокислотных остатков в пептидной цепи. Помимо этого изучение аминокнслотного состава белков позволяет сделать некоторые заключения о реакционной способности белковой молекулы. В табл. 5 представлен аминокислотный состав ряда белков. В графе А указано содержание аминокислот в %, в графе В — в грамм-молях на IO5 г белка. Такой подсчет позволяет сопоставлять аминокислотный состав различных белков. В зависимости от содержания в белках аминокислот с различными функциональными группами (кроме а-СООН и C-NH2), в них могут преобладать кислые или основные, полярные или липотропные группы. К основным — катионным группам относятся конечные а-аминогруп-пы, є-аминогруппа лизина, гуанидинная группа аргинина и имидазоль-ное кольцо гистидина. Наиболее сильным основанием из этих трех аминокислот является аргинин. Константа диссоциации гуанидинной группы рК 12, 18, что вызвано образованием гуанидиний-иона, в котором положительный заряд распределен между всеми тремя атомами азота 'H2N nhV н- /С—NH- ------ NH2/ LH2N Более слабым основанием является лизин, рК' е-аминной группы—110,53. Самое слабое основание представляет собою гистидин, рК' имидазольного кольца равно 6,00. Имидазольное кольцо может образовывать мезомерные формы. CH----CH CH—-CH Il Il N NH <--------. HN N V:h/ К кислым анионным группам относятся концевые СООН-группы пептидных цепей и р- и укаРбоксильные группы аспарагиновой и глутаминовой кислот, не связанные в амидах. рК (|3-СООН)3,65. рК (у-СООН) 4,25. 482 Таблица 5 Аминокислотный состав некоторых белков Аминокислота Сальмин Гистон тимуса теленка Миоглобии лошади Г емоглобин Казеин Миозии кролика Пепсин Коллагеи Эдестии Глиадин Зеин А Б А Б А Б А в А в А I в А Б А в А I в I А I в А Ib 1,12 1 6,94 12 7,95 15 7,4( 54 3,20 36 6,5 73,С — 9,5 106,( 4,31 40 2,i: 24 10,52 118 2,95 3 5,07 9 5,85 13 5,60 48 2,00 26,7 1,9 25,2 6,4 29 27,2 363 ¦ 3,14 2 3,22 4 4,09 6 9,10 50 7,20 61,4 2,6 22,1 7,1 21 3,4 29,1 6,5 56 2,66 23 3,98 34 0 0 5,21 6 16,80 22 15,40 75 9,2'! 116,9) 15,6 119,С 10,4 271 7,5 58 21,1 164 1,64 1 20,05 24 — 0 0 6,1/ 10,8 281 5,6 42,8 4,7 36 J 11,9 91 5,0 38 5,80 4 4,04 5 3,34 5 3,90 22 10,6 92,2 1,9 16,7 5,0 15 15,1 131,3 4,25 36 13,55 116 10,53 91
Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены. |
|
|||||||||||||||||||||||||
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||
