Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Органическая химия -> Кочетков Н.К. -> "Химия природных соединений" -> 181

Химия природных соединений - Кочетков Н.К.

Кочетков Н.К., Торгов И.В., Ботвиник М.М. Химия природных соединений — К.: Наука, 1960. — 561 c.
Скачать (прямая ссылка): himiyaprirodnihsoedineniy1960.djvu
Предыдущая << 1 .. 175 176 177 178 179 180 < 181 > 182 183 184 185 186 187 .. 203 >> Следующая


Ряд методов определения N-концевых аминокислот основан на алки-лировании или ацилировании пептида и последующем гидролизе. В гидролизате концевая аминокислота обнаруживается в виде алкильного или ацильного производного. Наиболее важным и детально разработанным методом является метод динитрофенилирования белка, предложенный в 1945 г. Зангером и использованный им при установлении строения инсулина.

Пептид (или белок) обрабатывают 2,4-динитрофторбензолом в слабо щелочной среде (pH 9) при 20—25°. Образующиеся 2,4-динитрофе-нильные производные не распадаются во время кислотного гидролиза

510
пептидов и белков (исключение составляют динитрофенильные производные глицина, цистина, пролина и триптофана). Динитрофенильные производные аминокислот представляют собою кристаллические соединения, окрашенные в желтый цвет. Вследствие оттягивания электронов динитрофенилированным бензольным кольцом они обладают ясно выраженными кислыми свойствами, легко разделяются электрофорезом и хроматографией и определяются спектрофотометрически.

Инграм предложил использовать для определения концевых амин-ных групп реакцию восстановительного метилирования по Бауману. При действии на пептиды формальдегидом и одновременном восстановлении над палладием образуются N-диметильные производные пептидов, гидролизующиеся до диметиламинокислоты и аминокислот.

R—CH—CO—NH—CH(R')—CONHCH(R")CO . . . +H2/Pd-fHCOH------

I

NH* H2OtH-

R—CH—CONHCH(R')—CONHCH(R")CO . . .-------

N(CH3)2

R-CH-COOH+R —CH-COOH . . .

I I

N(CH3)2 NH2

Диметиламинокислоты не реагируют с нингидрином и их проявляют орцином, тимоловым синим и т. д.

Вследствие тенденции метильных групп к подаче электронов заряд на азоте диметиламинокислот несколько повышен, амфотерные свойства их выражены столь же ярко, как и у самих аминокислот. Разделение их методами электрофореза и хроматографией менее четко, чем

разделение динитрофенильных производных аминокислот. Диметильные производные аминокислот не имеют широкого применения при исследованиях строения пептидов.

Метод ацилирования белков, широко применявшийся в начале столетия, сейчас потерял свое значение, так как большинство ацильных производных гидролизуются аналогично пептидной связи. Исключение составляет остаток n-иодбензолсульфокислоты (пипсил), который связывается с аминогруппой прочнее, чем динитрофенильный остаток. .Обычно применяют пипсилхлорид, содержащий иод 135.

Ji-5-^ V-SQ2Cl-fNH2CH(R)CONHCH(R')CO . ..->

_» JU5_^ —SOaNHCH(R)CONH—CH(R')CO . . .

Пипсиламинокислоты можно отделить хроматографически, противоточ-ным распределением или определить, пользуясь радиохроматограммой. Пипсильную защиту полезно применять в тех случаях, когда N-конце-вым остатком являются глицин, цистин, пролин или триптофан.

Ряд методов основан на получении таких производных пептидов, которые в кислой среде распадаются с образованием циклических соединений, отщепляющихся от пептида. К ним относятся изоцианатные, тиоизоцианатные, карбаминовые и аналогичные производные. Наиболее важным из этих реактивов является фенилизоцианат и фенилизотиоциа-нат, использовать который предложил Эдман. При действии на пептид, например, фенилизотиоцианата в щелочной среде образуется фенил-изотиоциановое производное.

ОН'

C6H6NCS+NH2CH(R)CONHCH(R')CO . .----» C0HsNHCSNHCH(R)CONHCH(R')CO . ..

511
При осторожном нагревании с HCl в нитрометане оно диклизуется с распадом на фенилтиогидантоин и пептид.

if

R-CH-CO—NCH(R')CO ... н- R—CH—CO

I I \ +NH2-CH(R1)CO. .

NH NHC6H5 HN NC6H6

xCs/ ^csy

который извлекают в органический растворитель и определяют как таковой или гидролизуют до аминокислоты.

Оставшийся пептид можно подвергнуть вторичной обработке фе-нилизотиодианатом и отщепить следующий аминокислотный остаток. Таким образом, этот метод пригоден также и для установления последовательности аминокислотных остатков в пептидах. Френкель-Конрат видоизменил метод для микроопределения аминокислотных остатков в виде фенилтиогидантоинов на бумаге и определил с его помощью первые 8 аминокислот в кортикотропине.

Остальные приведенные ниже методы, основанные на образовании циклических производных, имеют ограниченное значение.

а. Пептид обрабатывают сероуглеродом и получают дитиокарбами-новое производное (I), которое в кислой среде при комнатной температуре расщепляется на 2-тио-5-тиазолидон и пептид. Тиазолидон (II) можно извлечь органическим растворителем.

ОН' н*

CS2+NH2CH(R)CONHCH(R)CO . . . »HSCS—NH-CH(R)CONHCH(R)CO . . .

R—CH—CO I

j \s+NH2-CH(R)CO . . .

NH-CS

II

б. При реакции пептида с эфиром ацилтиокарбаминовой кислоты (I) получают N-ацилтиокарбаминовое производное пептида (II); оно распадается в кислой среде на тиогидантоин и пептид, содержащий, также как и в описанных выше случаях, на один аминокислотный остаток меньше, чем исходный пептид.

OH'

RCONHCSR+NH2CH(R)CO-NHCH(R)CO . . .-----*

S I

Il H-

RCGNHCNHCH(R)CO—NHCH(R)CO . . .---> NH-CHR+ NH2CH(R)CO . . .

I I
Предыдущая << 1 .. 175 176 177 178 179 180 < 181 > 182 183 184 185 186 187 .. 203 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама