|
Химия природных соединений - Кочетков Н.К.Скачать (прямая ссылка):  пиз-глут-тре-ама-ала-іала-лнз. ¦-------О-хим-25------!-------- - . . .О-пеп-6 . -*> - . . .О-пеп-9 . . . асп-арг- -О-трнп-Ю- фал- !NH2 I глут-арг -О-трип-15- NH2 NH2 NH2 (асп-глут-тре-сер3'Ь ет-гнс) ----О-хйм-21--------------> -O- [-22- -(асп ала2-сер3)-тир-|(цис-асп-глут-мет2)-лиз-, <------О-хим-11 —> J і-------------О-хим-27---- і . . О-пеп-11 - О-трип-4— сер-арг- (цнс-асп-вал-про-тре-лиз-1фал |(глут-вал-лейц-сер*гис-)|(-асп-глут-ала-вал-)|(сер-цис-глут-ала-вал-)-лиз О-трип-7 • NH, I INH2 I NH1 -О-хим-31 —---------—-* I ч—-------------------------------------1-О хим-16- -1- NH11 !NHs . . О-пеп-Ю . . 1 *- . . О-пеп-7 . . . -—¦— О-трип-9 —• . О-пеп-3 ^O-X им-12- NH2I -0(Трип12- NH2 I ас п-лейц-!тре-лиз •О-трип-11- асп- 1(цис-ала-вал)-ли8 -О-трип-5- Г 1 NH, іс-асп-асп-глут-ала-тре-)-тир-| глут-сер-тир-|тре-сер-меп-)-|-(цис-асп-изол-тре-сер-)арг -----—О-хим-5——------------------------------------------->-|<-0-хим-2 -*'«-0-хим-6 -¦'•<-— - -— _______.____________________ Hj NHe I I I и-глут-ала-тре2-) лиз -Ox нм-19-—-—> '<— -О-трип-8- -О-трип-2 (глут-гли-тре-сер2) лиз —------О Хим-14--------— NH3 ; I (цис-асп-ала тир про-)-тир-|лиз -О-трип-14- I NH3 NH2 I ! I і 1 ! I гис- (вал-изол-)-(цис-асп-глут-глй-ала-про-)тир (вал2-про-гис)фен- і(асп-ал і сер-)-пал —I -----------------О-хим-29------------------ і <----О-хим-ЗО —.—> I <----------О-хим-4-> —О-хим-3-. . О-пеп-5 , . О-пеп-2 -О-трип-16 Примечание пеп — пепсин, хим — хлмотрипсии, трип—трипсин; О—окисленная тезігнХнодисі эинэос!хэ 8 3Hd /г Sm + uian I ЯП и-*- 2!to "YjJP -*-nnai/+adui — enu^uov ¦*¦ гйи ¦*- апП—етш irodu¦*¦ uvg — айш -~-mb — пд ¦*- m dao Шві JML Zukl I .uov iHNj ОТҐП dniu 'tip dao dao I dao I ШІи/2 заш dao I uifiuz 4 sdu I ОПП + UOV aduj I ifoen I dao snu dnui ^t/odu— uov и в +-onn—dnm-^sw—adut-^adui— uov — m +-uifiui*. ц _________________гЖ__________________________________^HKj . nut njj^ao uov^mt-^опг-^щ -*-ifadu~4mg-*dm+t/odu^ иоу^ппм-чи/іиг-*- зпП tm -*¦ uvg * dao -е шагу-*- афи-+ dao -*¦ dnui — dao -*¦шЛігг¦ _______________________________________1M' uv -*¦ чи uiaw-*- эпг- - uon-*HNJ Принимая в качестве постулата, что пептидная цепь не разветвлена и аминокислотные остатки соединены друг с другом только амин-ными и карбоксильными группами, авторы составили предварительную1 гипотетическую схему (рис. 8) последовательности аминокислотных остатков в рибонуклеазе. При эгом они основывались на специфическом действии ферментов. В пептидах, образовавшихся в результате трипсинного гидролиза, С-концевыми аминокислотами являются аргинин и лизин. Пептиды, выделенные из гидролизата рибонуклеазы химотрипсином, содержат » основном в качестве концевых С-аминокислот остатки тирозина и фенилаланина. Определение строения каждого из пептидов при помощи метода динитрофенилирования и метода Эдмана, обработкой лейцинаминопеп-тидазой и карбоксипептидазой, а также гидролизом на более низкомолекулярные пептиды позволило постепенно расшифровать всю структуру рибонуклеазы, представленную на рис. 8. Существенно, что к аналогичному заключению о отроении рибонуклеазы пришла другая группа исследователей, возглавляемая Аффинсеном. Эти авторы предварительно динитрофенилировали рибонуклеазу. При этом наряду с а-аминной группой блокируются и е-аминогруппы лизина, что еще более увеличивает специфичность трипсина. Так как рибонуклеаза содержит только 4 остатка аргинина, то в результате гидролиза было выделено 5 пептидов, строение которых устанавливалось частичным гидролизом и при помощи описанных ранее методов. Параллельно с определением последовательности аминокислотных остатков в рибонуклеазе проводилось и определение положения ди-сульфидных мостиков. Спакман, Myp и Штейн нашли, что рибонуклеазу можно гидролизовать трипсином и химотрипсином без предварительного окисления дисульфидной связи, если проводить гидролиз В 2-МО-лярном растворе хлоргидрата гуанидина. Ими было получена 6 пептидов, которые затем подвергались окислению иадмуравьиной кислотой и исследовались. Таким образом было установлено, что S—S мостики расположены в положениях 1—б, 2—7, 3—8 и 4—5. Руль и Анфинсен в своей работе по определению положения ди-сульфидных связей использовали способность рибонуклеазы расщепляться субтилизином. Они установили следующие положения S — S мостиков: 1—6, 3—7, 8—2 и 4—5. Рибонуклеаза является вторым (после инсулина) белком, строение которого расшифровано. Из изложенного фактического материала следует, что в настоящее время исследователи могут определить совершенно точио аминокислотный состав белков и установить с достаточной степенью достоверности: а) N-концевые и С-концевые аминокислотные остатки в цепи; б) число пептидных цепей, входящих в состав белка;
Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены. |
|
|||||||||||||||||||||||||
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||
