|
Химия углеродов - Кочетков Н.К.Скачать (прямая ссылка):  Результаты, сходные с хроматографией на бумаге, при разделении моносахаридов дает метод электрофореза на бумаге30. Хотя проведение электрофореза по сравнению с хроматографией требует более сложного ¦оборудования, разделение веществ с помощью электрофореза происходит быстрее. Известно много случаев успешного применения электрофореза для исследования смесей, которые с трудом поддаются разделению путем хроматографии на бумаге. Поэтому электрофорез является ценным методом анализа моносахаридов, дополняющим метод хроматографии на бумаге31. Электрофорез особенно успешно применяется для обнаружения моно-¦сахаридов, в молекуле которых имеются основные (как в аминосахарах) или кислые (как в альдоновых, уроновых, сахарных кислотах, фосфатах и сульфатах Сахаров) группировки (см., например,32). В тех случаях, когда необходимо разделить нейтральные моносахариды, используют их способность образовывать отрицательно заряженные комплексы с борной кислотой или ее солями33"65, с молибдатами36, вольфраматами, германа-тами37 и рядом других неорганических анионов; разные анионы предъявляют часто различные требования к стереохимии моносахарида, необходимой для образования устойчивых комплексов. Естественно поэтому, "что выбор комплексообразователя и условий проведения электрофореза, в первую очередь рН растворов, весьма существенно влияет на результат разделения (см.31). Для обнаружения зон веществ на электрофореграм-мах применяется большинство реагентов, используемых при хроматографии на бумаге. В последние годы широкое применение для исследования смесей моносахаридов приобрела хроматография в тонком слое, отличающаяся быстротой, относительной простотой выполнения и очень высокой разрешающей способностью19. Если для свободных моносахаридов хроматография на бумаге еще остается более точным методом разделения, то для многочисленных производных моносахаридов с пониженной полярностью хроматография в тонком слое является поистине незаменимой. Наилучшие результаты получены при разделении малополярных производных (типа полных ацетатов, ацетилированных гликозидов, алкилиде-новых производных) на окиси алюминия38' 39, среднеполярных (типа полностью или частично метилированных моносахаридов) — на силикагеле40, 12 Гл. И. АНАЛИЗ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ МОНОСАХАРИДОВ , наконец, незамещенные моносахариды хроматографируют на пластинах с порошкообразной целлюлозой или кизельгуром1*. В настоящее время для анализа моносахаридов все шире и шире при-еняется метод газо-жидкостной хроматографии41' 42. Свободные моно-ахариды не обладают достаточной летучестью для того, чтобы их можно ыло анализировать этим методом, поэтому моносахариды переводят в егко летучие триметилсилильные производные43' 44. Введение газо-жид-остной хроматографии для анализа метилированных моносахаридов начительно упростило установление строения поли- и олигосахаридов штодом метилирования44"-47. Описанные выше аналитические варианты хроматографического раз-еления требуют для исследования в среднем несколько десятков микро-раммов вещества. Однако в принципе любой из этих методов может быть рименен для препаративного разделения смесей Сахаров в количестве до ескольких граммов и более48. Для получения в индивидуальном состоя-ии свободных моносахаридов и разделения продуктов гидролиза метили-юванных полисахаридов наибольшее применение находит распределительная хроматография на колонках с целлюлозой48, аналогичная хрома-ографии на бумаге. Системы растворителей для разделения Сахаров на ,еллюлозе подбираются в предварительных опытах хроматографирова-[ием на бумаге. Хроматографию на бумаге используют, как правило, и ,ля определения состава фракций, полученных в результате препаратив-юго разделения. Хроматография на больших листах бумаги применяется I как самостоятельный метод препаративного выделения сравнительно не-юльших количеств моносахаридов (до нескольких сотен миллиграммов), (бладающий очень высокой разрешающей способностью16. Для препаративного разделения моносахаридов и их высокополяр-шх производных применяется также хроматография на колонках со :месью угля и целита50; этот метод используется главным образом для зазделения олигосахаридов с различным молекулярным весом. Для сред-ш- и малополярных производных (например, гликозидов, алкилиденовых, метилированных, ацилированных производных) наиболее эффективной жазывается хроматография на колонках с силикагелем или окисью алю-ликия, причем условия разделения легко можно подобрать с помощью хотЕетствугсщей хроматогргфии в тонком слое. Часто применяется также юнообменная хроматография, в основном для разделения кислых моно-:ахаридов (фосфатов51, уроновых52 и альдоновых63 кислот) и аминосаха-эов54, хотя в отдельных случаях ионообменные смолы предложены и для зазделения смесей нейтральных Сахаров55. Высокоэффективным методом фепаративного разделения, получающим все более широкое распростра-1ение для производных углеводов, может служить газо-жидкостная хроматография. МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ МОНОСАХАРИДОВ Хроматографические методы исследования позволяют сделать 1редположение о строении моносахарида или его производного с большей дли меньшей степенью вероятности, но для полной идентификации в строгом смысле этого слова необходимо выделение вещества в индивидуальном :остоянии. Известно много примеров, когда разные вещества имеют сходные величины так что совпадение Р^р еще не является доказательством идентичности сравниваемых соединений. Строение исследуемого вещества может быть окончательно установлено только после выделения гго в индивидуальном состоянии и определения ряда физико-химических характеристик (температура плавления, удельное вращение, инфракрас-
Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены. |
|
|||||||||||||||||||||||||
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||
