|
Химия углеродов - Кочетков Н.К.Скачать (прямая ссылка):  Основное принципиальное ограничение метода метилирования состоит в том, что при гидролизе метилированного олигосахарида теряется почти вся информация о последовательности связи мономерных звеньгв в цепи, за исключением данных о концевых невосстаиавливающих звеньях, дающих сполна метилированные производные моносахаридов. Так, истолкование данных метилирования любого разветвленного олигосахарида приводит к неопределенности, поскольку нельзя судить о том, к какому из спиртовых гидроксилов моносахаридного звена, лежащего в точке разветвления, присоединен тот или иной фрагмент олиго-сахаридной цепи. Действительно, даже в простейшем случае (для разветвленных трисахаридов) различные структуры приводят после метилирования и гидролиза к одному и тому же набору метилированных моносахаридов, например16: Исключение составляют только такие разветвленные олигосахариды, в которых к точке разветвления присоединены одинаковые фрагменты олигосахаридной- цепи. Для неразветвленных олигосахаридов неопределенность, возникающая при истолковании результатов метилирования, состоит в невозможности установить относительное положение различных фрагментов, находящихся внутри олигосахаридной цепи, так как перестановка этих звеньев не отразится на наборе метилированных Сахаров. Это можно про-шглюстрировать следующим примером16: ОПРЕДЕЛЕНИЕ РАЗМЕРОВ ОКИСНЫХ ЦИКЛОВ В случае неразветвленных восстанавливающих олигосахаридов такая неопределенность возникает уже для тетрасахаридов, а для невосста-навливающих олигосахаридов она неустранима даже в случае трисахари-дов. Так, например, результаты, полученные при метилировании раффинозы17, позволяют приписать ей структуры X или XI: Условия метилирования и анализ получаемых продуктов. Метод метилирования требует выполнения следующих операций: полного метилирования исс.гедуемого олигосахарида, гидролиза полученного соединения и установления стрсения метглированных моносахаридов. Очень важным условием ЯЕЛяется достижение полноты метилирования, так как в противном случае еозможны грубые ошибки в определении структуры. Методы синтеза метилоЕых эфиров Сахаров уже рассматривались ранее (см. стр. 159). В случае олигосахаридов обычная схема метилирования состоит в обработке сахара по методу Хеуорса18 (для соединений, устойчивых к щелочам) или Куна13. Если необходимо, далее Мб производят дополнительное метилирование по методу Пурди19. Контроль за ходом реакции лучше всего осуществлять с помощью тонкослойной хроматографии, а окончательную проверку полноты метилирования выполняют с помощью функционального анализа на метоксильные группы или ИК-спектроскопии (отсутствие гидроксильной полосы поглощения). Следующая стадия исследования состоит в гидролизе метилированного производного олигосахарида. Однако, по-видимому, эта стадия не всегда необходима. Недавно был предложен метод определения места присоединения концевого моносахарида к восстанавливающему звену диса-харида с помощью масс-спектрометрии метилированных20 или триметил-силильных20а производных. Пути распада этих соединений под действием электронного удара резко различны в зависимости от места присоединения моносахаридных остатков друг к другу, что позволяет однозначно определять строение метилированного дисахарида по его масс-спектру. Такой путь изучения строения олигосахаридов представляется весьма перспективным. Однако до настоящего времени генеральным направлением метода метилирования остается расщепление метилированных олигосахаридов до производных моносахаридов и изучение строения последних. Как правило, метилированные олигосахариды гидролизуются значительно труднее, чем исходные олигосахариды, а при жесткой обработке кислотами может происходить частичная деструкция метилированных Сахаров, в особенности деметилирование, что весьма существенно искажает результаты. Поэтому в ряде случаев вместо гидролиза более удобным оказывается метанолиз метилированного олигосахарида, проводимый чаще всего обработкой метанольным раствором хлористого водорода (см., например,6' 21). В этих условиях деметилирование и другие побочные реакции, вызываемые кислотами, протекают в меньшей степени. Разделение полученных при метанолизе метилированных метилгли-козидов является наиболее трудоемкой стадией всего исследования. Обычно проводят гидролиз метилгликозидов и разделяют образовавшуюся смесь метилированных моносахаридов распределительной хроматографией на целлюлозе (см., например,22) или с помощью адсорбционной хроматографии на силикагеле23 или смеси угля с целигом84. Применяют также и другие сочетания хроматографических методов25. Наиболее совершенным методом разделения метилированных метилгликозидов является газо-жидкостная хроматография (см. стр. 412). Современные приборы позволяют препаративно разделять десятки миллиграммов смесей метилированных метилгликозидов. В аналитических целях использование приборов, прокалиброванных по набору заведомых соединений, дает возможность непосредственно производить достаточно надежную идентификацию метилированных метилгликозидов и количественное определение их содержания в гидролизате26.
Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены. |
|
|||||||||||||||||||||||||
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||
