Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Органическая химия -> Кочетков Н.К. -> "Химия углеродов" -> 197

Химия углеродов - Кочетков Н.К.

Кочетков Н.К., Бочков А.Ф., Дмитриев Б.А., Усов А.И. Химия углеродов — М.: Химия, 1967. — 674 c.
Скачать (прямая ссылка): himuglerodov1967.djvu
Предыдущая << 1 .. 191 192 193 194 195 196 < 197 > 198 199 200 201 202 203 .. 209 >> Следующая

но
снгон
а -галактозидаза
сн2он
он
н,он
+
450
Гл. 16. УСТАНОВЛЕНИЕ СТРОЕНИЯ ОЛИГОСАХАРИДОВ
Характерно, что при действии а-галактозидазы на раффинозу происходит расщепление гликопиранозидной связи, с трудом поддающейся кислотному гидролизу, а лабильная к кислотам фуранозидная связь остается незатронутой. Провести в таком направлении кислотный гидролиз не удается. Поэтому кислотный и ферментативный гидролиз в ряде случаев оказываются дополняющими друг друга методами расщепления.
При использовании гликозидаз для исследования строения олигоса-харидов возможны три источника ошибок. Первый из них заключается в недостаточно полной изученности субстратной специфичности фермента, которая почти никогда не носит абсолютного характера.
Так, например, инвертаза катализирует гидролиз сахарозы и раффинозы, но не действует на лихнозу60. Причина такого различия заключается в том, что действие инвертазы блокируется заместителями в положениях 1 и 3 остатка фруктозы. Незнание этой особенности субстратной специфичности инвертазы могло бы привести к ошибочному заключению об отсутствии в лихнозе p-D-фруктофуранозидной связи. Поскольку в настоящее время механизм действия ни одной из гликозидаз полностью не выяснен, информация об их субстратной специфичности может быть получена исключительно эмпирическим путем. Очевидно, что исследование всех возможных типов субстратов даже для одного фермента крайне затруднительно. Поэтому при использовании гликозидаз всегда приходится считаться с возможностью ошибки, связанной с проявлением той или иной еще неизвестной особенности их субстратной специфичности.
Другим источником ошибок могут служить посторонние ферментативные примеси, сопутствующие гликозидазам. Поскольку выделение чистых гликозидаз, как правило, представляет достаточно сложную задачу, вопрос об их однородности является весьма существенным. Поэтому при начале работы с новой партией фермента, как правило, необходимо исследовать препарат на наличие других гликозидаз и в случае необходимости производить дополнительную очистку или избирательное ингибирование ферментативной примеси. Эффективными избирательными ингибиторами многих гликозидаз являются лактоны соответствующих альдоновых кислот66.
Ферментативный гидролиз гликозидных связей in vitro—обратимая реакция. Поэтому при использовании гликозидаз для частичного гидролиза необходимо исследовать синтетазную активность фермента и применять разбавленные растворы, что смещает равновесие в сторону гидролиза. В противном случае возможны серьезные ошибки, связанные с наличием в гидролизате олнгосахаридов, образующихся синтетическим путем, которые можно принять за продукты деструкции исследуемого.
В настоящее время ряд гликозидаз производится промышленным путем, однако их число невелико. Сложность получения чистых ферментов и трудности достаточно полного изучения их субстратной специфичности сильно ограничивают возможности применения ферментативного гидролиза для исследования строения олигосахаридов.
МЕТОДЫ РАСЩЕПЛЕНИЯ, ОСНОВАННЫЕ НА ИЗБИРАТЕЛЬНОМ РАЗРУШЕНИИ НЕКОТОРЫХ МОНОСАХАРИДНЫХ ЗВЕНЬЕВ
Щелочной гидролиз. Гликозидные связи, как правило, устойчивы к действию оснований (см. гл. 6), однако восстанавливающие олиго-сахариды довольно легко подвергаются расщеплению под действием щелочных агентов. Такой распад протекает путем разрушения восстанавливающего звена по обычной схеме щелочной деструкции моносахаридов (см. гл. 3). В результате олигосахаридная цепь укорачивается на одно звено с восстанавливающего конца, что сопровождается глубокой дегра-
ЧАСТИЧНОЕ РАСЩЕПЛЕНИЕ ОЛИГОСАХАРИДОВ
451
дацией отщепляющегося моносахар идного фрагмента. Скорость этой реакции в сильной степени зависит от положения замгстителя в восстанавливающем звене олигосахарида. Так, в случае альдоз расщепление щелочами олигосахаридов с 1-—3-связями протекает чрезвычайно быстро, медленнее происходит разрыв 1—4- и 1->-6-связей, а олигосахариды с 1-*-2-связью устойчивы к действию оснований11' 67.
Щелочный гидролиз дает лишь принципиальную возможность ступенчатого расщепления исследуемого олигосахарида. Практически, однако, бывает трудно остановить распад на первой стадии гидролиза (отщепление одного моносахарида). Кроме того, неизбежное возникновение эпимерных моно- и олигосахаридов и кетоз в условиях щелочного гидролиза также сильно осложняет дело. Тем не менее в некоторых случаях этот метод с успехом был применен для исследования строения олигосахаридов (см., например,68).
Распад по Смиту и по Бэрри. Оба метода являются дальнейшим развитием метода периодатного окисления и приобрели в последнее время исключительно большое значение.
Полиальдегид, образующийся при периодатном окислении олигосахарида, представляет собой ациклический ацеталь, гидролиз которого протекает в гораздо более мягких условиях, чем гидролиз гликозидных связей:
он
Это различие открывает возможность избирательного расщепления окисленного периодатом олигосахарида по ацетальным связям с сохранением гликозидных связей моносахаридных звеньев, не подвергшихся действию окислителя. Однако эта возможность не может быть реализована непосредственно, так как лабильность образующихся альдегидов к кислотам сильно осложняет картину гидролиза. Чтобы обойти это затруднение, необходимо стабилизовать альдегидные функции в молекуле окисленного олигосахарида. По методу Смита для этого прибегают к восстановлению боргидридом натрия, превращающему альдегидные группы в первично-спиртовые, а по методу Бэрри — к обработке продукта окисления фенил-гидразином в уксусной кислоте, в результате чего происходит отщепление альдегидов в виде фенилгидразонов. Очевидно, что деградация по Смиту и деградация по Бэрри приводят к избирательному расщеплению одигосахаридной цепи с образованием более низкомолекулярных фрагментов. Строение последних (включая конфигурацию гликозидных связей) может быть установлено обычными методами.
Предыдущая << 1 .. 191 192 193 194 195 196 < 197 > 198 199 200 201 202 203 .. 209 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама