Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 103

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 97 98 99 100 101 102 < 103 > 104 105 106 107 108 109 .. 185 >> Следующая

РИС. 9.10. Графическое представление тушения флуоресценции этидийбромида в растворе и встроенного в двойную спираль DNA,, (По данным [2в' с разрешения
Chcmical Society.)
рофора в растворе перед проведением экспериментов, в которых используется флуорофор, связанный с макромолекулой.
На рис. 9.10 также приведены данные по тушению Eli, встроенного между парами оснований двойной спирали DNA. В результате такого встраивания бимолекулярная константа тушения уменьшается в 30 раз. >го интерпретируют как результат етерического экранирования ЕВ, обеспечиваемого за счет DNA. Пары оснований DNA прилегают к флуорофору с обеих сторон и предотвращают столкновения с кислородом, В противоположность этому белки [ 33] и мембраны | 34] высокопроницаемы для молекулярного кислорода. Уменьшение k при связывании с; DNA иллюстрирует эффект етерического затруднения при тушении. Если макромолекула предотвращает контакт между флуорофором и тушителем, то следует ожидать существенного понижения значения k „ ч
9.8.2. влияние заряда на тушение флуоресценции
Сближению флуорофора и тушителя может препятствовать влияние заряда в такой же степени, как и стерические факторы. Например, I-- отрицательно заряженный тушитель, и можно ожидать, что он будет отталкиваться отрицательными зарядами окружения флуорофора. Подобным образом I” должен притягиваться к флуорофорам в положительно заряженном окружении. Притяжение или отталкивание будет зависеть от ионной силы раствора: уменьшаться с ее увеличением. В противоположность иодид-ионам нейтральные тушители, подобные кислороду, не должны быть чувствительны к заряду окружения флуорофора.
Данные, иллюстрирующие влияние заряда на тушение, приведены па рис„ 9 J1 [28]. Были исследованы заряженные полиаминокислоты, каждая из которых содержала небольшой процент триптофаиовых остатков в качество флуорофора., Один из сополимеров был получен на основе глутаминовой кислоты и, следовательно, отрицательно заряжен при нейтральных значениях pH. Другой сополимер - на основе лизина и, следовательно, при нейтральных pH заряжен положительно. Было проведено тушение флуоресценции триптофана в этих сополимерах и кислородом, и иодом.. Зависимость тушения от заряда локального окружения флуорофора неодинакова для 02 и 1~ из-за их различной полярности. Тушение кислородом нечувствительно к заряду сополимера, как и следует ожидать для незаряженного тушителя. Для обоих сополимеров
получена бимолекулярная константа тушения кислородом порядка !• Ю10 М"1 • с~1. Напротив, тушение П сильно зависит от заряда окружения триитофановых остатков, Для полилизина скорость тушения иодид-ионами превышает допустимое для диффузионно-контролируемой реакции значение, что указывает напредпо-
Кислород Модив-ион
Сополимер И, М"/ г0, НС H/rQ-10~/0 И, М_/ H/vQ -10
LY397- TRP3 20,3 г, о 1,02 О-В 2,3
glu9S-trp1 15,4 1,2 ± 0,3 1,г to,г О 0
РИС. 9.11. Графическое представление тушения заряженных полиаминокиспот, содержащих триптофан, кислородом и иодид-иономи
(По данным [ 28] с разрешения American Chemical Society.)
чтительную локализацию 1~ вокруг положительно заряженного полимера. Для иолиглутамата скорость тупи'.ни я значительно ниже, чем можно было ожидать для диффузионно-контролируемой реакции. Эти результаты показывают, что тушение любого флуорофора будет подвержено влиянию локального заряда, который может увеличивать или уменьшать концентрацию тушителя в окружающем пространстве»
9,8.3. Проникновение заряженных и нейтральных тушителей в белки
Внутренние области белков обычно рассматриваются как неполярные, Триптофановые остатки тоже неполярны. Можно ожидать, что по крайней мере некоторые из этих остатков должны быть внутри белков и поэтому недоступны для тушителей во внешней водной фазе» Это предположение проверяется путем сравнения тушения кислородом и иодидом флуоресценции триптофана в трииси-
ногене (рис. 9.12). Изоолектрическая точка трипсиногеиа 9,3, и, таким образом, он заряжен положительно при pH 3, при котором проводились эксперименты. Исходя из влияния заряда на тушение, как это наблюдалось для сополимеров аминокислот (разд. 9.8.2), следовало ожидать увеличения тушения ио-дидом. Тем не менее, наблюдается значительно более сильное тушение кислородом, чем иодидом. Константа тушения для кислорода составляет~ 40% от ожидаемой для диффузионно-контролируемой реакции. Подобные результаты были получены для большого числа белков [ 33, 34]. Быстрая диффузия кислорода внутри белков интерпретируется как результат высокой динамической подвижности матрицы белка, которая флуктуирует в наносекундном временном диапазоне таким образом, что обеспечивает свободную диффузию кислорода.
В противоположность этому для иодида наблюдается слабое тушение,.'Отсутствие в данном случае значительного тушения объясняется тем, что заряженные и гидратированные иодид-ионы не могут проникать внутрь неполярного ядра белка. Следовательно, путем сравнения тушения заряженными и незаряженными молекулами можно выявлять относительную проницаемость макромолекулы для этих веществ.
Предыдущая << 1 .. 97 98 99 100 101 102 < 103 > 104 105 106 107 108 109 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама