Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 104

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 98 99 100 101 102 103 < 104 > 105 106 107 108 109 110 .. 185 >> Следующая

Методические подробности, приведенные в подписи к рис. 9.12, иллюстрируют некоторые важные соображения для любых экспериментов по тушению. Длины волн возбуждения, выбранные для тушения кислородом и иодидом, соо
2,0
К
к°
US
1,0
РИС. 9.12. Зависимость тушения флуоресценции трипсиногена от концентрации кислорода или иодид-иона.
Тушение 02; 0,001 М НС], возбуждение при 280 нм; тушение 1“ : 0,001 М ИС1, возбуждение при 290 нм; [KCl] + [KI ] = 0,5 М; ЮмМ Na2s203. Флуоресценцию регистрировали при 334 нм для обоих образцов^ (По данным [зз] с разрешения American Chemical Society.)
Тд » 2,0 не
Тушитель И,М~7 К/г0 • 10го у
о* 8,7 0, 405 У
j.. 0,67 0,084 у
/ I"
Т---t---1
0,04 0,08 0,12
СО,] или CI~3, М
тнвляют 280 и 290 нм соответственно. Большая длина волны возбуждения для тушения иодидом обусловлена тем, что 1~ поглощает свет при 280 нм. Из-за итого может возникнуть эффект внутреннего фильтра, который приведет к кажущемуся уменьшению интенсивности флуоресценции и, таким образом, исказит данные по тушению. Независимо от того, какой тушитель используется, важно убедиться в отсутствии аффекта внутреннего фильтра, К ели такой аффект имеет мес/го, наблюдаемая интенсивность флуоресценции должна быть откорректирована. Следует отметить, что на измерение времен затухания флуоресценции, как правило, не влияют эффекты внутреннего фильтра, так как оно практически не зависит от общей интенсивности.
В подписи к рис. 9.12 для опытов по тушению иодидом отмечено использование КОЛ и Na 2S О . Хлорид калия применяется для поддержания постоянного значения ионной силы при изменении концентрации иодида в растворе, а Na2S203 необходим для поддержания иодида в восстановленном состоянии. В противном случае возможно образование реакционноонособного 12, который может проникать в неполярные области белков и мембран.
9.8.4. Определение поверхностной доступности триптофановых
остатков в бепках по тушению флуоресценции иодид-йонами
В предыдущем разделе отмечалось, что степень тушения флуоресценции триптофана иодидом меньше, чем степень тушения кислородом в эквивалентной концентрации. Такое различие интерпретировалось как результат неспособности иодид-иоиов проникать во внутренние области белка. Это наводит на мысль, что тушение 1~ или другими соединениями, не проникающими в белки, можно было бы использовать для определения той части общей интенсивности флуоресценции, которая связала с поверхностно-локализованными остатками.
Хотя ото и не видно из рис. 9Л 2, тушеиие флуоресценции триптофана иодидом обычно характеризуется изгибом графика Штерна - Фольмера вниз к оси х (рис. 9.13). При высоких концентрациях тушителя практически все доступные остатки потушены. Остаточная флуоресценция связана с недоступными для тушения остатками, поскольку их флуоресценция не зависит от концентрации тушителя.
Тушение двух типов флуорофоров, один из которых недоступен для тушителя, можно проанализировать, используя модифицированную форму уравнения Штерна - Фольмера [7 ]. Примем, что существуют два тина остатков триптофана, один из которых доступен (1) для тушения, а другой - недоступен (2) или "спрятан". Общая флуоресценция в отсутствие тушителя Fq определяется выражением
РИС. 9.13. Г рафики Штерна — Фольмера (а) и модифицированного уравнения Штерна - Фольмера (б) для двух типов флуорофоров, один из которых недоступен для тушителя.
где индексом 0 обозначена интенсивность флуоресценции в отсутствие тушителя. В присутствии тушителя интенсивность доступной фракции / уменьшается в соответствии с уравнением Штерна - Фольмера, в то время как "скрытая" фракция не тушится. Следовательно,
F
F « -----°---- + F (9.33)
1 + K[Q] 02 '
где К - штерн-фольмеровская константа тушения доступной для тушения фрак ции; [Q] — концентрация тушителя. Вычитание уравнения (9.33) из (9.32) дает
AF - F - F ~ F (L _ ) (9.34)
0 01 VI +:K[Q]/
Обращением уравнения (9.34) с последующим делением на уравнение (9.32) получаем
F 1 1
+ . -- (9.35)
AF f,K[Q] f
I
где / - доля начальной флуоресценции, доступная для тушения:
F
/ e — (9.30)
F +'F
02 01
Эта модифицированная форма уравнения Штерна - Фольмера позволяет определить графически f ^ и К. Па графики зависимости F^/AF от I/[ Q1 значении
/1 определяется по стукаемому отрезку, a -- по наклону, ()тсека«*мый
отрезок отражает экстраполяцию к бесконечно большой концентрации тушителя O/l Ql- 0). Чиачепие 0 -F) при данной концентрации тушители соответствует обратной величине потушенной флуоресценции. При этой концентрации только недоступные остатки будут флуоресцировать.
Предыдущая << 1 .. 98 99 100 101 102 103 < 104 > 105 106 107 108 109 110 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама