Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 105

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 99 100 101 102 103 104 < 105 > 106 107 108 109 110 111 .. 185 >> Следующая

Пример разделении остатков триптофана па внутренние и внешние дает тушение лизоцима иодид-иоиами [ 7). На рис. 9.14 приведены графики Штерна -Фольмера для тушения триптофана ионами I ~ в отсутствие и в присутствии (i М гуанидипгидрохлорида. 'h'o вещество денатурирует белок. Изгиб кривой вни’л в отсутствии денатуранта укапывает на наличие недоступной для тушения фракции флуорофоров. Пересчет этих данных по модифицированному уравнению Штерна - Фольмера (9.Я5) дает приблизительно прямую линию. Отсекаемый отрезок на оси у (/~1) равен 1,5 (рис. 9.14, б), следовательно, 66% общей флуоресценции нативного белка доступно для тушения. И противоположность нативному белку в присутствии 6 М гуанидипгидрохлорида наблюдается прямолинейная зависимость в координатах Штерна - Фольмера (рис. 9.14, а). Ие пользование модифицированного уравнения Штерна - Фольмсера в этом случае не даст дополнительной информации, за исключенном подтверждении того, что в денатурированном белке / 1, t.ov все триптофановые ос.татки стали доступны для
иодид-ионов.
Тушение1 поверхностно-доступных остатков триптофана в принципе' позволяет различить спектры испускания внутренних и внешних остатков. Относительно селективного тушении поверхностных остатков триптофана иодидом мы считаем, что остаточная флуоресценция ие-,ходит от "скрытых" тринтофа-
сг],л/ in;1 м"1
РИС. 9.14. а - график Штерна — Фольмера для тушения лизоцима иодид-иомами в присутствии (7) и в отсутствие (2) гуанидингидрохлорида.
0 - график в модифицированных координатах Штерна — Фольмера.
(С разрешения авторов работы [7) И American Chemical Society.)
новых остатков, и следует ожидать, что их флуоресценция должна быть сдвинута в коротковолновую область но сравнению с потушенными остатками,, Последние, как полагают, должны находиться па поверхности белка, и, следовательно, их спектр флуоресценции должен быть (‘двинут в длинноволновую область, Па рис. 9.15 приведены спектры испускания нативного и денатурированного лизоцима в присутствии и в отсутствие 0,2 М KI „ В результате а тушения спектр испускания нативного белка ('.двигается в коротковолновую область. Это происходит потому, что незатушенная флуоресценция обусловлена остатками, "скрытыми" внутри белка. Приведен также дифференциальный спектр (кривая 3), полученный по разности между незатушенным и потушенным спектрами испускания и соответствующий спектру испускания потушенных остатков. Как и предполагалось, флуоресценция этих остатков сдвинута в длинноволновую область по сравнению с полным спектром испускания. Такой спектральный сдвиг, наблюдающийся при тушении, доказывает селективное тушение определенной группы флуорофоров. Дифференциальный спектр показывает, что максимум испускания потушенных остатков имеет значение —350 нм - типичное для триптофановых остатков, ‘жеионировапных в воду. Существенно, что при тушении денатурированного белка не наблюдается спектральных сдвигов (рис. 9.15, б). Этого и следовало ожидать, так как все трип-тофоновые остатки экспонированы в растворитель и, следовательно, имеют одинаковые спектры испускания.
Длина Волны7 нм
РИС. 9.15. Спектры флуоресценции нативного (а) и денатурированного (¦б) лизо-цима.
1 — в отсутствие тушителя 0,2 М KI; 2 — в присутствии тушителя; 3 - дифференциальный спектр, соответствующий флуоресценции потушенных остатков триптофана; 4 — фон. Денатурация вызывается 6 М гуанидингидрохлоридом. (С разрешения авторов работы [71 и American Chemical Society.)
- а о 5 _ 5
а/
/ 4 /
3 о / /
к / У
У 3 У
/ У
Z о У
/
/ V °>85 Z У fft>03
1 I........ I I I 1 Г.. i_..... I I I
0 10 20 0 SO 100
Cl-]-', M-1 C0a]-f M-1
РИС. 9.16. Г рафики в модифицированных координатах Штерна — Фольмера для тушения пепсина кислородом и иодид-ионами [зз].
Различное тушение флуоресценции белков полярными и неполярными тушителями выявляется при сравнении тушения пои сипа кислородом и иодидом [33]. В этом случае использовалось модифицированное уравнение Штерна -Фольмера (рис. 9.16). Пепсин содержит шесть триитофановых остатков. Для кислорода отсекаемый отрезок на оси у равен 1 (рис. 9.16, б). Следовательно, все шесть остатков одинаково доступны для тушения кислородом. Принимая, что по крайней мере один остаток находится внутри белка, можно полагать, что пепсин проницаем для кислорода. Напротив, для тушения иодидом отсекаемый отрезок на ос1,и у соответствует доступности только 85% флуоресцирующих остатков (рис. 9.16, а)» Этот результат, по-видимому, указывает на то, что но крайней мере один из шести остатков находится внутри белка, в области, непроницаемой для I”.
Предыдущая << 1 .. 99 100 101 102 103 104 < 105 > 106 107 108 109 110 111 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама