Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 106

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 100 101 102 103 104 105 < 106 > 107 108 109 110 111 112 .. 185 >> Следующая

При разделении общей флуоресценции на доступную и недоступную фракции необходимо иметь в виду, что может существовать но два класса трипто-фановых остатков, а больше. Даже предполагаемая "недоступная" фракция может быть частично доступной для тушения. Приведенный выше способ обеспечивает полезное, но произвольное разделение на два условных класса трип-т о фан о вых о ст ат ко в.
9.8.5. Установление поверхностной доступности мембранно-связанных белков произеоцными пикопиния
В качестве последнего примера использования модифицированной формы уравнения Штерна - Фольмера приведены данные по тушению флуоресценции триптофана мембран саркоилазматичеокого ротикулума перхлоратом N-метил-
РИС. 9.17. График в модифицированных координатах Штерна - фольмера для флуоресценции триптофана в мембранах саркоплазматического ретикулума, иллюстрирующий частичную доступность мембранно-связанной Са2+-АТРазы для тушения [ 25].
1 — в буферном растворе; 2 — для мембран, разрушенных трифторэтанолом.
4-пиколиния [25]. Основным белком этих мембран является Са2+ -АТРаза, ]М-Метил-4-пиколиний тушит флуоресценцию триптофана динамическим путем, по-видимому, по механизму переноса заряда. Катион тушителя хорошо растворим в воде, и предполагается, что ото соединение будет тушить триптофа-новые остатки только на поверхности мембран. График в модифицированных координатах Штерна - Фольмера приведен на рис. 9J7. По отрезку, отсекаемому на оси у, доля доступных остатков оценивается как ^ 0,54. Разрушение мембран трифторэтанолом приводит к увеличению доступности триптофаиовых остатков для тушителя, растворенного в воде (f = 0,81). В последующей работе [25] авторы использовали другие тушители, которые локализуются на границе раздела липид - вода и тушат триптофановые остатки в этой специфической локализации. Используемые тушители представляли собой гидрофобные производные 4-метилпиколиния, такие, как М-гексил-4-пиколиний. Путем подобных исследований можно получить описание структурных особенностей мембранно-связанных белков с малым разрешением.
9.8.6. Применение тушения дпя выявления локализации мембранно-йвязанных флуорофоров
Флуоресцентные зонды широко используют для исследования структурных и динамических свойств мембран. Интерпретация полученных данных облегчается знанием локализации флуорофора по отношению к поверхности раздела липид - вода.'Так как тушение зависит от молекулярного контакта меж-
ду флуорофором и тушителем, локализация флуорофора может быть установлена, если тушение флуоресценции проводится тушителями с известной локализацией. Днтроилокеижирные кислоты [ 35] широко используются в качестве мембранных зондов отчасти из-за того, что доступен ряд производных, в которых антроилокпи-группа расположена в различных положениях вдоль цепи жирной кислоты. Структура этих производных приведена на рис„ 9.18. Ясно, что антроилокои-груниа молекул должна тем глубже располагаться в мембране, чем дальше от карбоксильной группы находится место антроилокси-заместите-ля в жирной кислоте.
Локализация этих зондов изучалась но тушению Си2+ (рис. 9.19, а). Кажущиеся константы тушения значительно больше, чем можно ожидать для диффу-зионио-контролируомых реакций, что является следствием связывания Си2+ с липидами, главным образом на поверхности раздела липид - вода. Время затухания флуоресценции этих зондов в отсутствие тушителя ~ 10 не. Эффективность тушения уменьшается и ряду:.2-АР > 6-AS > 9-AS > 12-AS > М-9-А. Полученные результаты показывают, что антроилокси-заместители отодвигаются от поверхности раздела липид - вода в той же степени, как это можно предсказать, исходя из их структуры. М-9-А не является производным жирной кислоты, по, по-видимому, его незаряженная молекула расположена в центре бислоя и максимально удалена от поверхности раздела липид - вода.
н
СНЛСНр) с соон
’ *13 I
о
н
CHS(CH2) -С-(СНа) соон
* ‘А | 4
с=о
2-АР
6-AS
о
н
II
н
СНЛСН,) - С- (СЯ?) соон
3 8 I ' 7
с»о
о
с=о
9-AS
12 -AS
РИС. 9.19. Графики для выявления локализации мембранно-связанных флуорофоров при помощи полярного тушителя Си2+ (а) и неполярного тушителя диметилани-лина (ff) [35].
Локализация этих зондов была также определена при использовании липид-растворимого тушителя диметиланилииа (рис. 9Л9, б). Были получены аналогичные, но не полностью совпадающие результаты. Те флуорофоры, которые, как предполагается, наиболее глубоко проникают в мембрану (М-9-А,
12- AS), тушатся в наибольшей степени липид-растворимым тушителем, и снова кажущиеся бимолекулярные константы тушения больше, чем это возможно длг. диффузионно-контролируемой реакции. Расхождение связано с тем, что на оси концентраций (рис, 9J9, 6) приведены общие концентрации диметиланилииа.
Это неполярное соединение концентрируется в мембранах, что приводит к увеличению концентрации тушителя в окружении флуорофора. В разд. 9.8.8.1 будут описаны методы анализа таких данных с помощью коэффициентов распределения тушащих веществ между липидом и водой. Несмотря на это усложнение, приведенные результаты иллюстрируют возможность получения информации о мембранно-связанных флуорофорах по тушению флуоресценции.
Предыдущая << 1 .. 100 101 102 103 104 105 < 106 > 107 108 109 110 111 112 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама