Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 109

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 103 104 105 106 107 108 < 109 > 110 111 112 113 114 115 .. 185 >> Следующая

ко * к0
F* 1 Q {F - Q) —> ^ + Q 4-:теплота
Г I ‘i
F + h v
(F - Q)* - возбужденный комплекс флуорофора и тушителя, который еще не дезактивировался. Для реакций в возбужденном состоянии, таких, как образование эксиплекса с амином, (F -Q)* может быть зксинлексом. Однако мы будем рассматривать только случай, когда {F -Q)* не флуоресцирует. Если (F -Q)* флуоресцирует, необходимо более сложное выражение. При >> к^ тушение очень эффективно и константа тушения определяется kQ [ уравнение (9.11)]. Однако для менее эффективных тушителей к1 может быть сравнима с к2> тогда константа тушения равна
k2
*7ЙГ1‘*»Г (9-45)
Следовательно, у =¦? /(^ + к2) - доля столкновений, приводящих к тушению.
Из сказанного ясно, что увеличение вязкости может повышать эффективность тушения слабыми тушителями, так как оно замедляет разобщение флуорофора и тушителя. Увеличение продолжительности каждого диффузионного столкновения приводит к повышению вероятности тушения за время столкновения.
Мы отмечали, что это простой случай. Кажущаяся бимолекулярная константа рушения может быть сложной и зависеть от концентрации тушителя, вязкости и спектральных свойств комплекса, образующегося при столкновении.. Дополнительное обсуждение этого вопроса проведено в работах [ 21, 37 - 40]..
При благоприятных обстоятельствах такие усложнения могут быть исключены путем использования эффективных тушителей.
9.8.10. Обмен цитохромом 6g между мембранами
Цитохром &5 (cyt hs) - инто['ральный мембранный белок, который состоит из двух различных доменов. Гидрофобный "хвост", включающий приблизительно 50 аминокислотных остатков, ответствен за связывание cyt Ь5 с мембранами. Второй домен (гидрофильный) содержит гемовую область, которая находится, по-видимому, на поверхности мембраны. Обычно гемовые белки флуоресцируют слабо или не флуоресцируют совсем из-за переноса энергии с триптофановых остатков па нефлуоресцирующий рем, В cyt b5 расстояние между гемом и тринтофаповыми остатками гидрофобного "хвоста" достаточно большое для того, чтобы появилась заметная флуоресценция этих остатков. Фактически триптофановые остатки гидрофобного "хвоста" являются главной причиной флуоресценции этого белка. Триптофановая флуоресценция из гем-содержащей области cyt Ь5 не наблюдается. В cyt b5 из печени теленка флуоресцирует главным образом один из трех триптофановых остатков, расположенных в гидрофобном "хвосте'’, Этот остаток находится на 21 X ниже поверхности раздела липид - вода, недалеко от центра бислоя [ 41 ].
Тот факт, что этот остаток обусловливает флуоресценцию cyt 6g, позволяет разработать простой метод измерения кинетики обмена cyt из печени
100
РИС. 9.23. Спектр флуоресцон- 20
ции цитохрома 1>5 [ 43].
,2
Приведены спектры в буферном растворе в присутствии 0,5 мМ POP С и 0,5 мМ ВгРС, а также контрольные спектры РОРК и Hr PC. {С разрешения American C.homirnl Society.)
320 № 360 380 400
Длина волны, нм
теленка между везикулами [42]. Был синтезирован бромсодержащий фосфо-липид-1,2-бис(9,10-дибромстеароил)-(С4)-глицерин-3-фосфорилхолии* (ВгРС). При связывании cyt &5 с везикулой, состоящей из этого липида, флуоресценция триптофана из области "хвоста" тушится (рис. 9.23). Напротив, связывание cyt с небромированным липидом приводит к усилению флуоресценции белка. Было найдено, что относительная флуоресценция cyt прямо пропорциональна доле cyt Ъ 5, связанного либо с пальмитоилолеоилфосфатидилхоли-ном, либо с ВгРС (рис. 9„24). При смешивании связанного с РОРС cyt 6g с везикулами ВгРС наблюдается зависимое от времени уменьшение флуоресценции. Напротив, при смешивании cyt ?>g, связанного с ВгРС, с везикулами РОРС наблюдается постепенное возрастание флуоресценции со временем. Эти зависящие от времени изменения происходят вследствие обмена cyt Ь5 между везикулами (рис. 9.25). Полученные результаты, а также данные по линейной зависимости флуоресценции cyt Ь5 от его доли в каждом типе везикул были использованы для вычисления скорости обмена cyt между этими везикулами. Из серии таких измерений был сделан вывод, что cyt обменивается между везикулами через водную фазу и что прямой контакт везикул дЛя обмена не нужен. Этот пример показывает, как селективное тушение может быть использовано для того, чтобы различить, в каком из двух окружений находится белок, и, таким образом, позволяет легко изучить количественно кинетику обмена. Поскольку имеется большое число возможных пар флуорофор - тушитель, подобная методика может быть применима и в других случаях.
РИС. 9.24. Зависимость относительной флуоресценции цитохрома bg в смеси мицелл РОРС и ВгРС от доли РОРС [42], (С разрешения American Chemical Society»)
*
С4 - стероидное число. - Прим. первв.
ВрвМЯ, мин
РИС. 9.25. Графическое представление кинетики обмена цитрхрома Ь5 между везикулами РОРС и Hr PC [ 42].
Предыдущая << 1 .. 103 104 105 106 107 108 < 109 > 110 111 112 113 114 115 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама