Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 117

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 111 112 113 114 115 116 < 117 > 118 119 120 121 122 123 .. 185 >> Следующая

Mg24-Со2+-АТРазы из саркоилазматического ретику лума маркировалась отдельно 5-[ 2-(иодацоти л) амипоэтил-5-амипонафталин-1-сульфокислотой (1,5-1AEDANS) и отдельно иодацетамидофлуореспеином (IAF) (рис. 10.9). IAEDANS является донором, a IAF - акцептором. Раздельно маркированные молекулы АТРазы встраивались в разный фосфолипидпые везикулы. В результате смешивания раздольно встроенных молекул АТРазы было получено, что спектр испускания представляет собой сумму спектров испускания раздельно маркированных молекул. Следовательно, во временной шкале данного -жеиеримента но происходит переноса энергии между IAEDANS и IAF. ')то указывает па медленный обмен молекулами АТРазы между раздельно реконструированными везикулами. Однако если маркированные IAEDANS и IAK молекулы АТРазы встраиваются в одни и то же липидные везикулы, то флуоресценция IAEDANS частично тушится, а флуоресценция IAF усиливается (рис. 10.9). Чти результаты согласуются с появлением переноса энергии между молекулами донора и акцептора. Возможно, наблюдаемый перенос энергии может быть вызван просто близким расположением маркированных молекул АТРазы при встраивании в одни и то же везикулы. Или точно так же перенос энергии может быть обусловлен латеральной диффузией мономеров АТРазы в плоскости липидного бислоя. г)ти возможности были проверены добавлением избытка липида к разбавленному раствору АТРазы. Добавление липида, приводящее к 10-кратпому разбавлению АТРазы, не влияет на степень переноса энергии. Наоборот, добавление 10-кратного избытка немаркированной АТРазы ликвидирует перенос, энергии. Оба наблюдения находятся в соответствии с образованием агрегатов АТРазы в мембране.
г)ти эксперименты иллюстрируют, каким образом метод перепос-а энергии может быть использован для прямой проверки наличия ассоциации между макромолекулами. Дальнейшая характеристика этой системы требует более детальных экспериментов. Из приведенных данных нельзя сделать вывод, образует ли АТРаза димер, тетрамер или другие; агрегаты. Действительно, в экспе-
IAEJ3ANS
nhch2ch2nhcch9-i
О
СООН
NHCCHoI ll L
Длина Волны 7 нм
РИС . 10.9. Графическое представление переноса энергии между молекулами АТРазы, маркированными IAEDANS и I AF [15.].
а - спектр испускания раздельно реконструированных комплексов АТРаза — липид; б — спектр испускания совместно реконструированных комплексов АТРазы. Точками показана вычисленная сумма индивидуальных спектров.
римеитах не ставилась цель - выявить эти свойства. Степень маркирования была различной - обстоятельство, которое может сильно усложнить более тщательный анализ, но ие влияющее на приведенные выше выводы.
10.3.2. Димеризация грамицидина в липидных биспоях
В предыдущем разделе было показано, каким образом метод переноса энергии может быть использован для выявления ассоциации молекул АТРазы, но далее мы указали, что для определения стехиометрии реакции ассоциации необходимы более точные количественные данные и более специфическое маркирование. В работе [16] перенос энергии между маркированными молекулами грамицидина был использован для определения того, что грамицидин в мембранах образует димеры, а не высшие агрегаты. Грамицидин-
линейный полипептид, состоящий из 15 аминокислот, увеличивает проницаемость мембран для ионов щелочных металлов и протонов. Концентрационная зависимость проводимости мембран показывает, что проводимость возрастает пропорционально квадрату концентрации грамицидина. Это свидетельствует о том, что действующим началом является димер грамицидина.
Стратегией, использованной для изучения ассоциации грамицидина в мембранах, было маркирование фенольного атома кислорода тирозина-11 молекулами либо донора (дансила), либо - акцептора [ 4-(диэтиламино)-фенил-азобензол-4-су льфо ни л а, DPBSJ (рис. ШЛО). Форстеровский радиус для этой донорно-акцеиторной пары составляет 39 А. В использованных мембранах весь грамицидин ассоциирован. Если образуются димеры, то формами, присутствующими
Заместитель у а/пома кислорода L~ тирозина -11
и_ грамицидин С
"sCsN/CH,
Данси ^грамицидин С
(Qp ы » n аог - РА ВС - грамицидин С
n -N зог- ЛРВ8 - грамицидин С
Мольная доля тушителя
РИС. 10.10. Графические зависимости относительных квантовых выходов дан-силграмицидина от мольной доли акцептора — DPBS-грамицидина [1б].
а — теоретические кривые для моделей димера; б — для гримера^ в — для тетрамера. Точки соответствуют экспериментальным значениям. Предполагаемая эффективность переноса энергии для димера и тетрамера приведена в процентах.
и мембране, являются DD, АА и AD-; между ними существует равношеие:
где D и А обозначают частицы, маркированные донором и акцептором соответствии по. Форма димера, содержащая два донора (DD), должна флуоресцировать в два раза сильнее, чем димер, содержащий только один маркированный донором мономер. По отношению к такой же отдельной маркированной молекуле интенсивность флуоресценции AD должна уменьшаться до (1 - Е), где Е - эффективность перенос;! энергии. Естественно, АА не флуоресцирует. Принимая во внимание эти рассуждения, отношение интенсивности флуоресценции F к интенсивности в отсутствие акцептора F можно записать в виде
Предыдущая << 1 .. 111 112 113 114 115 116 < 117 > 118 119 120 121 122 123 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама