Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 118

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 112 113 114 115 116 117 < 118 > 119 120 121 122 123 124 .. 185 >> Следующая

Для модели димера было'показано, что F/F = 1 - Fa, где о - мольная доля грамицидина, присутствующего в маркированной акцептором форме. Следовательно, интенсивность флуоресценции донора должна уменьшаться линейно в том случае, когда образуется только димер. Если при ассоциации грамицидина образуются тример или тетрамер, то должно наблюдаться более быстрое уменьшение F/F в зависимости от мольной доли акцептора. На рис. 10.10 приведены экспериментальные данные и теоретические кривые для димеров, тримеров и тетрамеров. .Лучше всего подходит модель димера с эффективностью переноса энергии 75%, хотя и следует отметить, что исключение модели тримера только па основании этих данных проблематично. Однако данные по проводимости также подтверждают модель димера, Используя эффективность переноса 75% и значение и 39 А, по уравнению (10.12) можно вычислить расстояние между дан-сильпым хромофором и DPBS равное 32,5 А.
10.3.3. Связывание гемоглобина с мембранами красных кровяных
При подходящих условиях измерение переноса энергии может быть использовано для прямого количественного определения ассоциации между белками и мембранами. Этот метод иллюстрируется связыванием гемоглобина (НЬ )
о обесцвеченными эритроцитами [ 17]. Обесцвеченные эритроциты маркировались 12-(9-антроилокси)стеариповой кислотой (12-AS), которая из-за отрицательного заряда локализуется главным образом во внешнем слое эритроцит-пых мембран. Существует значительное спектральное перекрывание испускания 32-AS с. полосой поглощении Соре гемоглобина (рис. 10.11). В результате можно ожидать эффективного перепое,а энергии от 12-AS к НЬ . 'Гак как гемовые кольца в гемоглобине не флуоресцируют, тушение флуоресценции
Ifb- AD^DD\- А А
(10.16)
F 2 [/)[)] +(1 -E)[AD] ' 2[Ш)Г+ [АО]
П.А1П________
2[DD] + [AD]
(10.17)
тепец
' Длина волн о/, нм
РИС. 10.11. Спектр испускания обесцвеченных эритроцитов, маркированных 12-AS (1), и спектр поглощения гемоглобина (2) [17].
На оси ординат приведены молярные коэффициенты экстинкции тетрамера.
12-AS должно происходить баз какого бы то ни было появления сенсибилизированного испускания.
Влияние добавленного НЬ па флуоресценцию маркированных 12-AS мембран покапано на рис, 10.12. В этом случае взаимодействие между НЬ и мгм-
Время
РИС. 10.12. Графическое представление влияния гемоглобина и сопи на интенсивность флуоресценции обесцвеченных эритроцитов, маркированных 12-AS [17]. (С разрешения ч American Chemical Society.)
бранами является в первую очередь электростатическим. Тушение может быть снято добавлением соли. Это также свидетельствует о том, что тушение не было вызвано 'эффектом внутреннего фильтра. Изменение интенсивности в ходе титрования различными количествами НЬ можно использовать для определения константы связывания и числа центров связывания на обесцвеченных эритроцитах. Такая общая методика может быть использована и для других систем. Однако для перехода от степепи тушения к расстояниям между хромофорами необходима более сложная теория.
10.3.4. Латеральная организация мембран
В качестве последнего примера использования стационарного флуоресцент ного переноса энергии обсудим, как такие измерения могут выявить предпочти тельное распределение или концентрирование липидов в определенных областях мембраны. Например, рассмотрим мембрану, содержащую области, которые находятся в жидком или твердом состоянии при данной температуре. Если донор и акцептор оба распределяются в одну и ту же фазу, то следует ожидать увеличения эффективности переноса энергии по сравнению со случайным распределением донора и акцептора между фазами. Наоборот, если донор и акцептор распределены в разные фазы, то степень переноса энергии должна уменьшаться -опять-таки по сравнению со случайным распределением.
Для количественного анализа таких данных требуется знание степени переноса энергии, ожидаемой для флуорофоров, случайно распределенных на поверхности мембраны. Для решения этой сложной проблемы необходимо учесть геометрическую форму бислоя (планарную или сферическую) и перенос между донором и акцептором для случая, когда они находятся на одной и той же стороне бислоя, равно как и для случая, когда они находятся на противоположных сторонах бислоя. Были использованы различные подходы [7,17 - 20} и, как правило, численное моделирование. Эти теории довольно сложны, и трудно дать их краткий обзор. Однако некоторые результаты поучительны и иллюстрируют общий вид ожидаемых зависимостей.
Па рис. 10.13 приведены предполагаемые эффективности переноса энергии для донорно-акцепторпых пар, местонахождение которых ограничено областью бислоя на поверхности раздела липид/вода. Некоторые особенности этих предсказываемых значений следует особо отметить. Эффективность переноса энергии не зависит от концентрации донора и растет с увеличением R . Только малые количества акцептора (0,4%) могут приводить к легко измеряемому тушению. Довольно легко понять, каким образом данные по эффективности тушения за счет переноса энергии могут быть использованы для выяснения, является ли распределение донора и акцептора случайным. Используя вычислен нов значение R сравнивают измеренную эффективность за счет переноса
Предыдущая << 1 .. 112 113 114 115 116 117 < 118 > 119 120 121 122 123 124 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама