Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 12

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 6 7 8 9 10 11 < 12 > 13 14 15 16 17 18 .. 185 >> Следующая

* Это утверждение автора неверно, поскольку спектром возбуждения называют зависимость интенсивности испусканий от частоты или длины волны возбуждающего света при постоянном потоке фотонов, падающих на образец. Напротив, квантовый выход определяют как отношение числа испущенных фотонов к числу поглощенных фотонов. Из-за этого спектр возбуждения сильно зависит от поглощения (оптической плотности) образца, что и используют в ряде аналитических мэтодов. Идеальный спектрофпуориметр должен был бы давать зависимость отношения числа испускаемых фотонов к числу падающих на образец фотонов от' частоты возбуждающего света, компенсируя изменение с частотой интенсивности возбуждающего света,. — Прим. ред.
РИС. 2.1. Блок-схема спектрофпуориметра (воспроизведено из рекламного проспекта фирмы SLM Instruments).
Па схеме (рис* 2Л) показаны также детали оптической части прибора, находящиеся вблизи держателя образца. Слектрофлуориметр для научно-исследовательских работ должен быть снабжен универсальными и надежными оптическими деталями* Оптический модуль, показанный на рис. 2Л, включает множество удобных деталей, наличие которых необходимо учитывать при приобретении или изготовлении прибора. Для зашиты от возбуждающего света или для перекрывания канала, по которому идет свет люминесценции, использованы затворы. Па пути потока возбуждающего света помешают систему растепления светового пучка. Она отражает часть возбуждающего света на эталонный образец, который, как правило, представляет собой устойчивый эталонный флуорофор. Система расщепления состоит из тонкого куска прозрачного кварца, который отражает ~ 4 % падающего света. Этого количества обычно достаточно для эталонного канала, в котором монохроматор не используется. Измеренная интенсив-
ность флуоресценции эталонного образца пропорциональна интенсивности возбуждающего света. Поделив интенсивность люминесценции образца на соответствующую величину для эталона, можно учесть колебания интенсивности излучения дугового источника.
На пути возбуждающего и испускаемого световых потоков ставят поляризаторы. Чаще всего поляризаторы отодвинуты; их вводят только для измерений анизотропии флуоресценции или когда необходимо выделить определенным образом поляризованную компоненту испускаемого и/ или возбуждающего света. Для точного измерения анизотропии флуоресценции требуется расположение поляризаторов под определенным углом, поэтому оправы поляризаторов должны быть хорошо закреплены и тщательно проградуированы. Оптический модуль (рис. 2.1) имеет дополнительный оптический путь с правой стороны от держателя образца. С его помощью можно проводить измерения анизотропии флуоресценции двухканальным методом (гл. 5), более точным, чем одноканальный метод, в котором этот дополнительный оптический канал не требуется (разд. 5.4).
2.1.1. Идеальный спектрофлуориметр
Пусть нужно записать’ спектры возбуждения и испускания, в которых отражена относительная интенсивность фотонов в единичном интервале длин волн (см. выше). Для получения таких "исправленных" спектров испускания отдельные детали прибора должны иметь следующие характеристики:
1. Источник света должен иметь постоянный выход фотонов на всех длинах волн.
2. Монохроматор должен пропускать фотоны всех длин волн с равной эффективностью.
3. Эффективность монохроматора не должна зависеть от поляризации.
4. Приемник (фотоумножитель) должен регистрировать фотоны всех длин волн с одинаковой эффективностью.
Эти характеристики для идеальных оптических систем представлены на рис. 2.2. К сожалению, источники света, монохроматоры и фотоумножители не обладают такими идеальными характеристиками. В результате приходится идти на компромисс в выборе отдельных деталей и исправлять неидеальные сигналы, полученные на приборе.
1 Спектрофотометры для измерения поглощения света имеют те же самые узлы, однако на них удаётся правильно измерять спектры поглощения, поскольку обычно измеряют отношение интенсивности света, пропущенного изучаемым образцом, к интенсивности света, пропущенного образцом, не содержащим флуоресцирующего вещества. Такие относительные измерения проводят при одинаковых условиях и при одной и той же длине волны, поэтому неидеальность аппаратуры аннулируется. Иное положение при измерении испускания флуоресценции,
Источник света
Монохроматор
Фотоумножитель
Длина волны
Длина волны
Длина болны
РИС. 2.2. Характеристики идеальных составных узлов спектрофпуориметра.
так как измерения интенсивности флуоресценции абсолютны, а не относительны. Сравнение флуоресцирующего образца с образцом, не содержащим флуорофора, бесполезно, поскольку последний не дает никакого сигнала и поэтому нечувствителен к зависимости отдельных компонентов оптической системы прибора от длины волны. Следовательно, возможность внутренней компенсации ограничена
2.1.2. Искажения спектров возбуждения и испускания
Дчя записи спектра возбуждения монохроматор испускания устанавливают на желаемую длину-волны, в большинстве случаев - на максимум испускания. После этого осуществляют сканирование светового потока из монохроматора возбуждения по полосам поглощения флуорофора. Наблюдаемый сигнал может искажаться по следующим причинам:
Предыдущая << 1 .. 6 7 8 9 10 11 < 12 > 13 14 15 16 17 18 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама