Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 126

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 120 121 122 123 124 125 < 126 > 127 128 129 130 131 132 .. 185 >> Следующая

РИС. 11.5. Флуоресцентный спектр испускания индола [з].
1 — спектр испускания в гексане;
2— в гексане, содержащем 0,7% н-бу-танола; 3 —в гексане с 5% н-бутанола;
4~~ в 100%-ном б^таноле-, 5— в воде.
танола приводит к тушению такого структурированного спектра, сопровождаемому появлением бесструктурного длинноволнового спектра испускания, являющегося зеркальным отражением перехода индола. Эти результаты указывают на двойное испускание из состояний XL и 1Ё/}, причем на переход lLa растворитель влияет более сильно,-чем на переход х1>ь, и энергия перехода 1 La понижается в полярных растворителях. Большая чувствительность состояния iLa к растворителю кажется вполне обоснованной, так как в переход1 Lq по
Длина волны, нм
РИС. 11.6. Спектры поглощения некоторых производных триптофана [ю].
1,2 — н-гексилового эфира М-стеароил-Ь-триптофана; 3, 4 — 3-метилиндола. Спектры 1 и 3 сняты в метил циклогексане; 2 и 4 — после добавления 2,5% н-бутанола. (С разрешения American Chemical Society).
Длина волны, нм
посредственно вовлечен атом азота индола (см. разд. 5.3.1). Однако, как отмечалось, потеря структуры в спектре испускания может быть связана не с двойным испусканием из состояний и , а со специфическим влиянием растворителя на отдельный электронный переход,
Различная чувствительность состояний xLq и 1Lb к растворителю иллюстрируется спектрами поглощения производных триптофана, приведенными на рис. 11.6 [ 10]. Напомним, что структурированные пики в поглощении обусловлены состоянием . Добавление 2,5% бутанола приводит к уширению спектра и увеличению поглощения при длинах волн > 290 им. Полагают, что этот эффект связан с длинноволновым сдвигом бесструктурного перехода *JL при взаимодействии с полярной составляющей. Переход lL менее чувствителен к полярности растворителя и поэтому не сдвигается в длинноволновую область. Эти результаты согласуются со спектрами испускания,, Интенсивность структурированного испускания уменьшается, но сдвиг в присутствии бутанола не происходит (рис. 11.5),, В дополнение к этому специфическому эффекту растворителя наблюдается чувствительность индольного кольца к полярности растворителя, па что указывает дальнейший сдвиг испускания в длинноволновую область но мере увеличения концентрации бутанола до 100% (рис. 11.5). Подобные результаты были получены также в работх [11, 12], т.е. первоначальная потеря структурированного испускания при низких концентрациях полярной составляющей сменяется дальнейшим сдвигом в длинноволновую область при высоких концентрациях спирта. Авторы указанных работ объясняют сдвиг спектра образованием специфического комплекса между спиртом и производным индола. Образование комплекса кажется очень вероятным, но их точная стехиометрия вызывает сомнения. В любом случае ясно, что для интерпретации флуоресценции белков требуется рассмотрение и специфического, и общего влияния растворителя на триптофапсЬзые остатки.
11.2. Общая характеристика флуоресценции белков
11.2,1. Испускание тирозина и триптофана
При возбуждении на 280 нм в испускании большинства нативных белков преобладает флуоресценция триптофана. Это иллюстрирует рис. 11.7, на котором приведен спектр человеческого сывороточного альбумина (HSA), а также спектр испускания триптофана и смеси тирозина с триптофаном в молярном соотношении 18:1. Испускание триптофана находится в области более коротких длин воли по сравнению с испусканием триптофана в воде. Коротковолновый сдвиг является результатом экранирования триптофановых остатков от воды белковой матрицей. Несмотря на относительно большое число тирозино-
I/J max
РИС. 11.7. Флуоресцентный спектр испускания человеческого сывороточного альбумина и ароматических аминокислот.
1 — спектры испускания USA* 2 — триптофана; 3 —смеси тирозина и триптофана, эквивалентной той, которая найдена для IISA. (С разрешения авторов работ [4, 13].)
вых остатков, спектр испускания HSA, по-видимому, - спектр главным образом триптофана. Это кажется неожиданным, поскольку испускание тирозипов преобладает в указанной смеси тирозина с триптофаном в соответствии с пропорцией этих остатков в HSA. В противоположность сильному поглощению при 280 нм и высокому квантовому выходу в водных растворах испускание триптофана в большинстве белков слабое и часто недетектируемое. Отсутствие тиро-зинового испускания у большинства белков зависит от трехмерной структуры. Денатурация белков приводит к увеличению испускания тироэинов, но их вклад обычно меньше, чем найденный для эквимолярных смесей.
В связи с отсутствием тирозиновой флуоресценции в белках был высказан ряд соображений, в том числе относительно переноса энергии на триптофановые остатки и тушения близлежащими группами полипептидной цепи. Следует ожидать, что перенос энергии (гл. 10) будет эффективен, тако как форстеровский радиус для переноса тирозин - триптофан составляет 14 А, и это расстояние сравнимо с диаметром большинства белков. Однако перенос энергии не главная причина отсутствия у HSA флуоресценции тирозина. Единственный триптофано-вый остаток HSA может быть разрушен фотоокислением или удален путем ферментативного расщепления [ 15]. Если бы перенос энергии был главной причи-
Предыдущая << 1 .. 120 121 122 123 124 125 < 126 > 127 128 129 130 131 132 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама