Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 129

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 123 124 125 126 127 128 < 129 > 130 131 132 133 134 135 .. 185 >> Следующая

11.3. Факторы, влияющие на спектры испускания белков
11.3.1. Трехмерная структура
Максимумы испускания триптофана и его производных очень чувствительны к полярности растворителя, равно как и к специфическим взаимодействиям между растворителем и индольным кольцом. Поэтому можно ожидать, что максимумы испускания белков должны зависеть от тех факторов, которые влияют на экспонирование триптофановых остатков в водную фазу. Например, спектр испускания человеческого сывороточного альбумина претерпевает ко-
ротковолиовый сдвиг но сравнению о испусканием триптофана в воде (рис. 11.7). Этот коротковолновый сдвиг интерпретируют как результат ткра-нироваиин триптофановых остатков от водной фазы белков. Как и можно было ожидать, максимумы испускания белков варьируются главным образом из-за различий усредненной локализации тгих остатков в нативных белках. Максимумы испускания некоторых белков, содержащих единственный триптофановый остаток, приведены в табл. 11.1. Для некоторых белков, таких, как рибопук-леаза, спектры сдвинуты в коротковолновую область, что указывает па экранирование ’этих остатков от растворителя. В других случаях (глюкагоп и АСТН) наблюдается длинноволновый сдвиг испускания. Не удивительно, что для таких небольших белков возможен значительный контакт три пт о фанового остатка с водной фазой. Подобные различия в максимумах испускания получены для многотриптофановых белков; например, альдолаза имеет максимум испускания при 328 нм, а бычий сывороточный альбумин - при 343 нм [21]. Денатурация белков гуапидингидрохлоридом и мочевиной приводит к длинноволновому сдвигу в спектре испускания и приблизительно к одному и тому же максимуму испускания для всех белков. Следовательно, различия максимумов испускания для нативных белков обусловлены их трехмерной структурой. Сильно сдвинутый в коротковолновую область максимум испускания аз,урина требует специаль ного комментария. Азурип - это бактериальный медьсодержащий белок, в котором только один триптофановый остаток. Это единственный в настоящее1, время белок, имеющий структурированный спектр испускания тринтофанового ое-
Табпица 11.1. Максимумы испускания и времена затухания флуоресценции белков, содержащих единственный остаток триптофана [22l
Белок Л V НС
max’
нм
Аэурин 308 4,0
Рибонуклеаза Т 324 3,5
342 6 ,0
Нуклеаза 334 5,0
Монеллин 342 2,6
Глюкагон 352 2,8
АСТИ 352 3,1
татка, форма которого подобна форме спектра индола в гексане (рис,. 11.5). К тому же в его спектре поглощения проявляется четкий пик при 293 нм, подобный пику, наблюдаемому для производных триптофана в метилциклогекеане (рис. 11.6). Так как контакт ипдольного ядра с молекулами полярного растворителя, как известно, приводит к тушению структурированного испускания и уширению спектра поглощения, то полученные результаты были объяснены потерей контакта этого триптофанового остатка с какими бы то ни было полярными группами. Следовательно, этот единственный остаток должен быть полностью погружен внутрь белка и окружен неполярными аминокислотными остатками. Важно отметить, что триитофановые остатки, погруженные внутрь белков, не обязательно должны проявлять структурированное испускание. Скрытые внутри остатки могут быть связаны водородной связью с полярной группой, которая также находится внутри белка. Пока еще имеется слишком мало данных для критической опенки этого интересного, необычного белка.
Спектральные данные для монеллипа служат хорошим примером влияния денатурации на спектр испускания белков. Монеллин - сладкий на вкус белок (мол. масса 11000), содержит две субъединицы, один триптофаповый остаток и семь тирозиновых остатков. Спектрально-флуоресцентные свойства мопол-лина в присутствии и в отсутствие денатурирующих веществ наиболее типичны для белков и иллюстрируют влияние трехмерной структуры белка.
Флуоресцентный спектр испускания нативного мопеллина приведен на рис. 11.12 [24, 25]. При возбуждении па 260 нм небольшая спектральная состип-ляющая, связанная с флуоресценцией тирозина, видна при 300 нм. Эта слабая составляющая типична для флуоресценции тирозина в нативных белках. При возбуждении на 295 нм видна только флуоресценция триптофана. Небольшие пики при 260 нм и 295 нм обусловлены рассеянным светом на длине волны возбуждения. При записи этих спектров были использованы скрещенные поляризаторы для минимизации рассеянного света. Возбуждающий пучок света был поляризован вертикально, а испускание детектировалось через поляризатор с горизонтальной ориентацией. 11апомним, что рассеянный свет сильно поляризован в вертикальном направлении, и горизонтальный поляризатор может быть использован для блокирования этой составляющей (гл. 2).
При денатурации мопеллина либо гуаиидингидрохлоридом, либо мочевиной наблюдается резкое увеличение вклада тирозина в спектр испускания (рис. 11.13). Эти изменения были использованы для проверки зависимости флуоресценции мопеллина от концентрации гуанидина (рис. 11.14). В ходе денатурации полуширина спектра испускания увеличивается вследствие возрастания относительного вклада тирозиновых остатков в спектр испускания. Максимумы испускания и тирозина, и триптофана относительно независимы от кон-
Предыдущая << 1 .. 123 124 125 126 127 128 < 129 > 130 131 132 133 134 135 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама