Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 130

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 124 125 126 127 128 129 < 130 > 131 132 133 134 135 136 .. 185 >> Следующая

Длина волны, нм
РИС. 11.12. Флуоресцентный спектр испускания нативного монеллина [25].
РИС. 11.13. Флуоресцентный спектр испускания денатурированного монеплина. (С разрешения авторов работы [24] И Elsevier Biomedical Press.)
центрации гуанидина, но следует подчеркнуть, что кажущиеся максимумы ио-пускания для каждой компоненты в перекрывающемся спектре не обязательно соответствуют действительным максимумам испускания этих компонент.
На рис. 11.14, б приведены относительные квантовые выходы q, поляризация флуоресценции Р и параметр г. Последний представляет собой отношение интенсивности флуоресценции при 340 нм к интенсивности при 304 нм, которая обусловлена в первую очередь испусканием тирозина. Это отношение уменьшается с увеличением концентрации гуанидина, потому что увеличивается интенсивность испускания тирозина. Поляризация уменьшается вследствие диссоциации индивидуальных субъединиц и разворачивания полипептидпых цепей. При разворачивании увеличивается свобода движений триптофановых остатков, приводящая к понижению значения поляризации. Эти данные наиболее типичны из тех, которые можно ожидать при денатурации белка, и иллюстрируют полезную чувствительность спектральных свойств белковой флуоресценции к трехмерным структурам белков.
РИС. 11.14. Спектральные свойства монеллина в присутствии гуанидингидрохло-рида.
(С разрешения авторов работы [24] и Elsevier Biomedical Press.)
11.3.2. Связывание белков с субстратами и другими макромолекулами
Во многих случаях связывание белков о субстратами или другими макромолекулами приводит к сдвигу в их спектре испускания. Например, максимум испускания лизоцима сдвигается от 340 до 331 нм при связывании субстрата три-И-ацетил-с-глюкозамипа. Этот сдвиг интерпретируют экранированием триптофановых остатков в активном центре от воды. Помимо связывания субстратов к значительным изменениям в спектральных свойствах триптофана могут приводить также другие факторы, в том числе само ассоциация белков и связывание белков с мембранами.
Самоассоцианию мелиттина и связывание его с бислоями иллюстрируют типичные спектральные изменения, происходящие при ассоциации. Мелиттин -пептид пчелиного яда, содержащий 26 аминокислот и единственный триптофа-повый остаток. Этот пептид самоассоциируетоя в растворе. Более того, мелиттин связывается клеточными мембранами, приводя к их лизису. На спектральные свойства тринтофанового остатка влияют и самоассоциация, и связывание мелиттина с мембранами, что позволяет оценить это явление количественно [26, 27].
Самоассоциация мелиттина приводит к коротковолновому сдвигу спектра испускания триптофана (рис. 11.15). В этом случае самоассоциация вызыва-
РИС. 11.15. Графики, иллюстрирующие влияние самоассоциации мелиттина под воздействием сопи на его флуоресцентный спектр испускания.
«*•» спектр испускания мелиттина в разбавленном буферном растворе (кривая 1) и в буферном растворе, содержащем 2,4 М Na Cl (кривая 2); б — влияние соли на сдвиг спектра испускания триптофана. Концентрация мелиттина; 1 — 180 мкМ; 2 —
20 мкМ; 3 — 1,9 мкМ. (С разрешения авторов работы [2б] и North Holland Publishing Co.)
РИС. 11.16. Влияние концентраций соли (а) и мелиттина (б) на поляризацию флуоресценции.
Концентрация мелиттина; 1 — 20 мкМ; 2 — 200 мкМ. (С разрешения авторов работы [27] и North Holland Publishing Co.)
лась увеличением концентрации соли. При высоких концентрациях добавленных солей мелиттин образует тетрамеры. Однако и увеличение концентрации мелиттина вызывает подобный коротковолновый сдвиг. Такие сдвиги интерпретируют как результат уменьшения степени экспонирования единственного триптофаио-вого остатка при образовании тетрамера. Не только максимум испускания, по и поляризация флуоресценции триптофанового остатка меняются при образова-
РИС. 11.17. График, иллюстрирующий влияние липида на поляризацию флуоресценции мелиттина.
Rf — молярное отношение липид — белок для фосфатицилсерина (кривая 1) и лизо-лецитина (кривая 2). (С разрешения авторов работы [27] и North Holland Publishing Co.)
ими тетрамера (рис. 11.16). Видио, что при ассоциации поляризация возрастает от 0,07 до 0,12. Изменения поляризации происходят главным образом из-за увеличения кажущегося объема молиттииа при самоассоциации. Эти данные могут быть использованы для расчета константы связывания. Подобные изменения в спектре испускания и поляризации наблюдаются также при связывании мелиттина с липидами (рис. 11.17). Было обнаружено более быстрое увеличение поляризации для фосфатидилсерина по сравнению с лизолештииом, что указывает па более сильное связывание с отрицательно заряженным липидом. Пока но выяснено, связывается ли мелиттин с мембранами в виде мономера или в виде тетрамера [28]. В любом случае ясно, что чувствительность триптофановых остатков к полярности окружения или к размерам вращающегося целого дает большие возможности для количественной оценки реакций ассоциации между белками и другими макромолекулами.
11.3.3. Возможное испускание тирозината в белках
Предыдущая << 1 .. 124 125 126 127 128 129 < 130 > 131 132 133 134 135 136 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама