Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 131

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 125 126 127 128 129 130 < 131 > 132 133 134 135 136 137 .. 185 >> Следующая

В предыдущем обсуждении полагалось, что максимум испускания тирозина находится вблизи 305 нм. Однако имеются сообщения о феномене испускания тирозинатом при 345 нм [29 - 31]. Спектральные свойства этого испускания сопоставимы с триптофановыми. Значение рКд гидроксильной группы тирозина в основном состоянии 10,3, поэтому обычно считают, что ионизация в основном состоянии не происходит, Тем не менее при возбуждении рКа уменьшается до 4 или ниже и ионизация может происходить даже при нейтральных значениях pH. Ионизация в возбужденном состоянии облегчается в присутствии близко расположенных акцепторов протонов, которыми могут быть ионы фосфата бу-
Длина Волны, нм РИС. 11.18. Спектр флуоресценции тирозина [29].
Числа соответствуют концентрации К2НР04; pH 7,5. (С разрешения American Society for Photobiology.)
ферного раствора или глутаминовые или аспарагиновые остатки в белке. Водородная связь между этими акцепторами и гидроксильной группой тирозина может возникать в основном состоянии, приводя к образованию комплекса, в котором происходит реакция при возбуждении тирозина. Образование комплекса в основном состоянии может также вызывать длинноволновый сдвиг в спектре поглощения тирозина , из-за чего возможна путаница с флуоресценцией триптофана.
Влияние фосфата па спектр испускания тирозина показано па рис. 11.18 [29]. Увеличение концентрации фосфата приводит к постепенному уменьшению
Длина волны, нм РИС. 11.19. Спектр поглощения тирозина [29],
Числа соответствуют концентрации К2НР04; pH 7,5. {С разрешения American Society for Photobiology.)
испускания тирозина при 305 нм. Одновременно наблюдается испускание при 345 нм, которое обусловлено тирозинатом. Тушение тирозина фосфатом протекает как по динамическому, так и по статическому механизмам. Важен статический механизм тушения, поскольку образование комплекса между тирозином и фосфатом вызывает сдвиг спектра поглощения в область больших длин волн (рис. 11.19). Напомним, что возбуждение при 290 - 300 нм часто исиоль зуется для достижения селективного возбуждения триптофановых остатков'.
Из длинноволнового сдвига спектра поглощения комплекса тирозина (рис. Ц,Ц)) можно предсказать, что испускание тирозината при 345 им может быть селективно возбуждено в длинноволновой области спектра.
Тирозин-тирозинатный спектр испускания, имитирующий флуоресценцию триптофана, был обнаружен для двух штотокеинов, которые не содержат триптофана [31]. Спектры испускания, полученные при возбуждении па 275 и 290 им, приведены на рис. 11.20. При возбуждении на 275 нм ясно виден вклад
РИС. 11.20. Флуоресцентные спектры испускания цитотоксинов, не содержащих триптофана [31].
а - спектр цитотоксина А; б*—спектр цитотоксина В. 1 — при возбуждении на 275 нм; 2 — на 290 нм.
тирозина, величина которого уменьшается при использовании длины возбуждения 290 нм. Это имеет явное сходство с результатами, полученными для белков, содержащих и тирозин, и триптофан (см. рис. 11.8). В этом случае испускание при 345 нм, по-видимому, обусловлено тирозиновыми остатками, которые в основном состоянии связаны водородной связью с глутаминовыми или аспарагиновыми аминокислотными остатками белка. Величины тирозинатиого испускания белков пока неизвестны. Обычно тирозипатное испускание слабое из-за его низкого квантового выхода и, следовательно, составляет малую долю по отношению к триитофановому испусканию. Однако возможность такого испускания следует учитывать в любом детальном анализе спектра испускания и/или времен затухания флуоресценции белков.
11.4. времена затухания флуоресценции белков
Время затухания для триптофана в белках составляет 1 - 7 не в зависимости от типа белка и его третичной структуры. Денатурация белков приводит к практически одинаковым временам затухания порядка 2,5 по; это указывает на то, что третичная структура, а не аминокислотная последовательность является причиной разнообразия времен затухания нативных белков [32]. Детальная интерпретация этих времен затруднена присутствием в большинстве белков нескольких триптофаповых остатков, и даже для белков, содержащих один триптофаповый остаток, наблюдается сложная кинетика затухания флуоресценции. Рассмотрение данных по восьми белкам, содержащим один триптофаповый остаток, показывает, что кинетики затухания интенсивности флуоресценции лучше соответствуют многоэкспоненциальному закону затухания, чем одно-экспоненциальному [32]. Важно помнить, что полученные значения предэкспо-ненциального фактора ос • и индивидуальных времен затухания т. не доказывают существования индивидуальных излучающих центров с интенсивностями ос т. или временами затухания т. . На этот момент следует обратить особое внимание, потому что природа миогоэкспононциалыюго затухания флуоресценции белков еще не до конца попята. Существует несколько возможных причин: гетерогенность основных состояний из-за наличия коиформационных изомеров белка, кинетика релаксации вокруг возбужденной молекулы или внутренняя гетерогенность флуоресценции триптофана. В разных белках при разных условиях каждый из этих факторов, вероятно, дает некоторый вклад в гетерогенность времен затухания флуоресценции белков.
Предыдущая << 1 .. 125 126 127 128 129 130 < 131 > 132 133 134 135 136 137 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама