Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 133

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 127 128 129 130 131 132 < 133 > 134 135 136 137 138 139 .. 185 >> Следующая

300 340 380
Длина волны, нм
ты (рис. 11.21 и 11.22) приведены для иллюстрации возможного влияния растворителей и для того, чтобы подчеркнуть сложности при интерпретации зависимости затухания от длины полны на основании только гетерогенности основного состояния.
11.5. Распознавание индивидуальных аминокислотных остатков в белках по кинетике затухания флуоресценции
В течение последних нескольких лет делались попытки использовать кине -тические методы для разделения спектров испускания и времен затухания индивидуальных триптофановых остатков в белках. Иэ-За трудностей, присущих таким измерениям, успешным оказалось распознавание лишь для белков, содержащих два различных остатка. Одно из таких разделений было проведено на алкоголь-дегидрогеназе из печени лошади (LADH) [ 39]. LADH - димерный белок с молекулярной массой 80 000. Каждая субъединица содержит два триптофановых остатка - Тгр-15 и Тгр-314, Один из них (Тгр-15) экспонирован в раствор, в то время как Тгр-314 погружен и гидрофобный карман на поверхности димера.
Чтобы различить индивидуальные спектры испускания, Бранд с соавторами [ 39] измеряли кинетики затухания флуоресценции при близко расположенных длинах волн в спектре испускания. Эти данные соответствовали двухэкспонен-циальиому закону затухания флуоресценции:
-1/Т -*/т2
/(X, «)- %(А)е +а2(Л)е (11.3)
Каждое из двух, наилучшим образом соответствующих экспериментальным данным времен затухания практически не зависело от длины волны в отличие от предэкснонепциальпых факторов, сильно зависящих от длины волны (рис. 11.23). Предполагалось, что причиной зависимости времени затухания от длины волны является гетерогенность основного состояния. Если это действительно так, то доля интенсивности f каждого остатка при любой длине волны равна
а 1 М т 1
/.(А) - __---------------.-— (11.4)
«1(А)т1 + «2(А)т2
а2(Л)т2
/2(ЛЬ- -...... ... .......- (11.5)
«.Мт, +о,(Х)та
Спектры, разделенные таким методом, приведены на рис. 11.23. Спектр более короткоживущей составляющей (3,8 не) сдвинут в коротковолновую область по сравнению с общей флуоресценцией, и его приписывают остатку, погруженному на
РИС. 11.23. Времена затухания, амплитудщ и разложение спектра испускания флуоресценции алькогольдегидрогеназы из печени лошади [зэ].
(С разрешения American Chemical Society.)
границе раздела субъединицы. Более долгоживущая составляющая (7,22 не) имеет сдвинутый в длинноволновую область спектр, приписываемый экспонированному остатку триптофана. Такое соотнесение было подтверждено детальным анализом влияния субстратов и тушителей на кинетики затухания.
Подобное разделение было получено для молекул лакрепрессора из Е. coli [ 40] и 3-фосфоглицераткиназы [ 41], каждая из которых содержит два разных остатка триптофана. В обоих случаях времена затухания практически не зависели от длины волны испускания, и сдвинутое в коротковолновую область испускание было более короткоживущим. В разделе 11.4.1 отмечалось, что релаксация диполей также приводит к возрастанию среднего времени затухания с увеличением длины волны испускания. Разложение на индивидуальные спектры с использованием уравнений (11.4) и (11.5) возможно, если причиной зависимости времени затухания от длины волны является гетерогенность основных состояний, а не реакции в возбужденном состоянии. Кроме того, подобное увеличение среднего времени затухания наблюдалось и для белков, содержащих единственный остаток триптофана [37]. Было обнаружено, что такие белки проявляют многоэкспоненциальные кинетики затухания интенсивности флуоресценции [ 32]. Мы не хотим подвергать критике разложение белковой флуоресценции на компоненты на основании кинетик затухания. Однако следует отме-
тить, что времена затухания индивидуальных триптофановых остатков могут зависеть от длины волны в результате дипольной релаксации белковой матрицы вокруг возбужденного состояния. Если это явление существенно, то уравнения (11.4) и (11.5) неприменимы. Мы отмечали, что результаты кинетических измерений доказывают существование зависимости времен затухания от длины волны для индивидуальных остатков, но эти времена были фиксированы для того, чтобы минимизировать число варьируемых параметров. Также неожиданно, что короткоживущая составляющая соответствует коротковолновой составляющей спектра в каждом из этих белков. Точно такой результат наблюдается для релаксационных процессов (рис. 11.21). Для гетерогенности основных состояний следовало бы ожидать, что короткоживущая компонента может наблюдаться как в коротковолновой, так и в длинноволновой области спектра испускания, в зависимости от структуры белка. Эти результаты, основанные на малом числе белков, проанализированных к настоящему моменту, могут оказаться ошибочными. Однако более длительные времена жизни при больших длинах волн, по-видимому, общая отличительная черта флуоресценции белков как для одно-, так и для многотриптофановых белков [ 32, 42]. Более того, на основании данных, полученных в растворителях с разной полярностью, можно ожидать, что, триптофаповые остатки, экспонированные в воду, должны иметь более короткие времена затухания и меньшие квантовые выходы [ 43 , 44]. Следовательно, общее возрастание времени затухания с увеличением длины волны испускания представляется неожиданным в свете известной чувствительности индола к полярности растворителя. Однако испускание белков было разделено на несколько классов, и было найдено, что для внутренних остатков квантовый выход более низок [45]. Таким образом, более короткие времена затухания внутренних триптофановых остатков могут быть следствием характеристических особенностей флуоресценции белков и не релаксационные процессы вокруг возбужденного состояния могут обусловливать приведенные выше наблюдения. Кажется вероятным, что и гетерогенность, и релаксация дают свой вклад в зависимость времен затухаиия белков от длины волны. Относительная важность каждого процесса в настоящее время не ясна, и, по-видимому, она различна для разных белков.
Предыдущая << 1 .. 127 128 129 130 131 132 < 133 > 134 135 136 137 138 139 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама