Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 134

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 128 129 130 131 132 133 < 134 > 135 136 137 138 139 140 .. 185 >> Следующая

11.6* Динамика белков, регистрируемая флуоресцентными методами
Иэ-за присущего флуоресцентной спектроскопии естественного временного окна в наносекундной временной шкале она идеально подходит для регистрации процессов в этом временном диапазоне. Известны три типа параметров, ко-
торые показывают, что белки обладают значительной сегментальной подвижностью в наносекуцдном диапазоне: тушение флуоресценции белков кислородом, кинетики затухания анизотропии флуоресценции и зависимость времен затухания флуоресценции белков, содержащих единственный триптофановый остаток, от длины волны. Иптепретащя последних дискуссионна, потому что зависимость времени затухания от длины волны может быть результатом либо релаксации, либо гетерогенности. Опыты по тушению флуоресценции кислородом свидетельствуют о проницаемости белковой матрицы для кислорода в наносекуцдном временном диапазоне. Измерение анизотропии показывает, что угловое смещение триптофаиовых остатков слишком быстрое для того, чтобы его можно было объяснить вращательной диффузией белка. Это избыточное движение варьирует среди триптофановых остатков и зависит от изучаемого белка и точности условий эксперимента. Времена затухания флуоресценции белков, содержащих единственный триптофановый остаток, возрастают с увеличением длины волны испускания, поэтому можно предположить релаксацию диполей.
11.6.1. Динамика бепков, регистрируемая по тушению флуоресценции белков
Динамическое тушение флуоресценции определяется частотой столкновений между флуорофором и тушителем. Рассмотрим триптофановый остаток, погруженный в белковую матрицу. Рентгеноструктурпым анализом белков установлено, что аминокислотные остатки плотно упакованы, так что внутри белка нет свободного пространства для молекулы, подобной кислороду [ 46]. Однако то, что кислород тушит флуоресценцию триптофана в белках, указывает, что кислород диффундирует сквозь матрицу большинства белков со скоростью, составляющей 20 - 50% скорости диффузии в воде [47]. Для объяснения такой быстрой диффузии было предположено, что белковая матрица должна флуктуировать в наносекундном временном диапазоне таким образом, чтобы обеспечить проникновение кислорода.
Типичный график Штерна - Фольмера для тушения флуоресценции белка кислорбдом приведен на рис. 11.24. Отметим, что константы тушения сравнимы с теми, которые наблюдаются для свободного триптофана. Для 12 изученных белков бимолекулярные константы тушения находятся в диапазоне (0,2 -0,5)- Ю10 1УГ1- с"1. Если бы кислород не мог проникать внутрь белка, следовало бы ожидать, что график Штерна - Фольмера отклонится от прямой в сторону оси концентраций (разд. 9.8.4). Таких отклонений не наблюдается, что указывает на приблизительно одинаковую доступность всех остатков в изученных белках. Более того, не существует корреляции между бимолекулярными коп -
[О\\,М
РИС. 11,24. Графики Штерна - Фольмера для тушения флуоресценции белков кислородом [4?!.
1 — данные для триптофана; 2 — для бычьего сывороточного альбумина; 3 — для иммуноглобулина G; 4— для альдолазы; 5— для сх-химотрипсина. (С разрешения American Пн-mieul Society.)
стантнми тушения и максимумами испускания белков (рис. 11.25). Если бы тушились только внешние остатки, то константы тушения для остатков, имеющих спектр, сдвинутый в коротковолновую область, были бы меньше, что и наблюдается для тушения акриламидом [ 22].
Из-за неожиданности этих результатов был проведен ряд экспериментов для того, чтобы убедиться, что наблюдается тушение при столкновениях, и для того, чтобы исключить другие возможные артефакты. То, что наблюдаемое тушение происходит при столкновениях, было доказано сопоставлением квантовых выходов и времен затухания флуоресценции (разд, 9.2.1). Уменьшение времени затухания пропорционально снижению квантового выхода подтверждает, что молекулы кислорода диффундируют к флуорофору в течение времеии жизни возбужденного состояния. Перенос энергии между разными остатками, как существенный фактор в тушении, также исключается. Если бы происходил быстрый перенос энергии между триптофшювыми остатками и поверхностные остатки быстро тушились, то энергия с внутренних остатков могла бы быть перенесена на внешние остатки и, таким образом, внутренние остатки оказались
РИС. 11.25. Корреляция максимума испускания флуоресценции белков с бимолекулярной константой тушения кислородом [47].
1 — а-химотрипсин; 2— бычий сывороточный альбумин; 3 — человеческий сывороточный альбумин; 4-эдестин; 5— карбоангидраза; 6—- альдолаза; 7- карбо-ксипептидаза А; 3 трипсиноген; 9 —• иммуноглобулин G; 10 — лизоцим; 11 — пепсин;^- трипсин.
бы потушенными. Такая возможность была исключена путем возбуждения флуоресценции на краю длинноволновой области спектра поглощения. По причинам, которые не вполне ясны, перенос энергии между одинаковыми остатками при длинноволновом возбуждении не происходит [48]. Кроме того, было показано, что белки все еще сохраняют активность в присутствии наивысших концентраций кислорода [47].
Предыдущая << 1 .. 128 129 130 131 132 133 < 134 > 135 136 137 138 139 140 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама