Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 135

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 129 130 131 132 133 134 < 135 > 136 137 138 139 140 141 .. 185 >> Следующая

Как было описано для мембранно-связанных флуорофоров (разд. 9.8.8.1), кажущаяся бимолекулярная константа тушения может увеличиваться, если тушитель предпочтительно распределяется в объем, непосредственно окружающий флуорофор. Заметное влияние распределения на тушение флуоресценции белков кислородом кажется маловероятным, поскольку максимальная растворимость кислорода в неполярных растворителях всего лишь приблизительно в шесть раз больше растворимости в воде. Если бы существовало некоторое предпочтительное рапределение кислорода в неполярные области белков, то такая локализация должна быть отвергнута по соображениям стабильности свернутого белка, структура которого должна была бы быть разрушена для того, чтобы принять молекулы кислорода. Даже если концентрация кислорода, удерживающегося внутри белка, несколько возрастет, то скорость диффузии кислорода должна быть слишком большой для того, чтобы ею можно было объяснить наблюдаемое тушение. Следовательно, данные по тушению кислородом указывают на гибкость белковой матрицы.
Следует отметить, что к подобным выводам приводит тушение флуоресценции белков акриламидом, за исключением того, что бимолекулярные константы тушения сильнее различаются для разных белков и в целом меньше, чем кон-' станты, наблюдаемые для кислорода [ 22]. Графики Штерна — Фольмера для тушения акриламидом флуоресценции ряда белков, содержащих единственный остаток триптофана, приведены на рис, 11.26. Некоторые остатки, например экспонированные в растворитель остатки в АСТН и монеллине, легкодоступны для акриламида. Другие остатки, такие, как (ШАаза Т и азурин, скорее экранированы от тушения при столкновениях. В противоположность тушению кисло родом (рис. 11.25) в данном случае наблюдается четкая корреляция бимолекулярных констант тушения с максимумами испускания белков (рис. 11.27). Это говорит о том, что акриламид предпочтительно тушит экспонированные остатки триптофана.
Для того чтобы различить тушение экспонированных и погруженных остатков триптофана, было изучено [ 49] влияние повышенной вязкости на тушение ряда белков (табл. 11.2). Как и предполагалось для экспонированных остатков, повышение вязкости приводит к уменьшению тушения. Для более погруженных остатков, таких, как остатки в USA, RNAa3e Т и альдолазе, влияние вязкости на константу тушения было значительно ниже. Так как на тушение погру-
EQ],M
РИС. 11.26. Зависимость тушения белков, содержащих единственный остаток триптофана, от концентрации тушителя — акриламида [22].
(С разрешения American Chemical Society.)
^ max, НМ
РИС. 11.27. Корреляция максимумов испускания белков с константами тушения акриламидом [22].
1—азурин; 2—HSA-SDS; 3—RNAaea нуклеаза из Staphylococcus aureus;
5 —HSA при pH 2,5; 6 - IIS А при pH 5,5., 7 - монеллин; 8 ~ глюкагон; 9 - АСТИ,, (С разрешения American Chemical Society.)
, Таблица 11.2. Зависимость тушения белков акрип-
амидом от вязкости [49]
Вода 50%-ный Фа К (в)
глицерин г Г '
^в v>
NATA 17,3 5,4 1,35 4,5
АСТН 13,0 6,0 1,7 3,6
Г лкжагон 10,5 5,0 1,7 3,5
Пепсин 9,5 3,5 1,1 3,0
Монеллин 4,2 2,2 1,35 2,6
Нуклеаза 5,2 2,4 1,2 2,6
HSA, pH 2,5. 3,4 2,1 1,2 2,0
(3-Трипсин 2,4 1,9 1,25 1,6
HSA, 0,2 М КС1 5,1 3,5 1,2 1,4
RNAa3a Т 1.1 0,9 1,0 1,2
1
Альдопаза 0,5 0,55 1,25 1,1
а Относительный квантовый выход в 50%-ном глицерине [qyl и в воде [ф^].
женных о(.пикон общая вязкость раствора не влияет, то авторы работы[49] вполне обоснованно заключили» что скоростьлимитирующей стадией должна быть диффузия через белок, но не через раствор. Следовательно, акриламид тоже может проникать в белковые матрицы.
11.6.2. Кинетика затухания анизотропии флуоресценции
Указания на динамические свойства белков дает также кинетика затухания анизотропии флуоресценции. Если триптофановый остаток неподвижен внутри белковой матрицы, то следует ожидать одноэкспоненциального затухания анизотропии [г ^ гq& ?^ф] с временем корреляции ф, сравнимым с вычисленным по формуле
т\ М
Ф * ---- (v + h) (11,6)
КТ V '
где М ~~ молекулярная масса; v •— удельный объем; А — степень гидратации белка; г) - вязкость растворителя. В противоположность этому, если остаток имеет свободу сегментальных движений, то кажущееся время корреляции будет меньше, чем предсказываемое уравнением (11.6), и затухание может стать мно-гоокспоненциальиым (разд. 6.1.3). В белках могут быть как подвижные, так и неподвижные триптофановые остатки.
Кинетика затухания анизотропии для человеческого сывороточного альбумина HS А, щелочного белка миелина (МВР) И нуклеазы Staphylococcus aureus приведены на рис. 11.28 [ 50]. При низкой температуре (8°С) время корреляции для затухания анизотропии HSA составляет 31 не, что сравнимо с вычисленным значением 40 но для сферы с М = 6400 и гидратацией 0,2 г на грамм белка. При повышении температуры наблюдается более быстрая потеря анизотропии за короткое время, что указывает на более быстрое угловое смещение единственного триптофанового остатка в HSA. Диапазон углов таких смещений должен быть ограничен, в противном случае более быстрое затухание должно было бы продолжаться до того момента, пока анизотропия не станет равной нулю. Из этих данных было вычислено время корреляции для быстрых движений, равное 0,14 нс,
Предыдущая << 1 .. 129 130 131 132 133 134 < 135 > 136 137 138 139 140 141 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама