Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 136

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 130 131 132 133 134 135 < 136 > 137 138 139 140 141 142 .. 185 >> Следующая

Подобно IISA при низких температурах, триптофаповый остаток в нуклеазе также оказывается неподвижным. Однако важно отметить, что анизотропия в нулевой момент времени может быть меньше, чем анизотропия, ожидаемая для триптофанового остатка в отсутствие каких бы то ни было вращательных смещений. г)то может указывать на возможность некоторых движений этого остатка за времена, слишком короткие для того, чтобы их можно было зарегистрировать на имеющемся оборудовании. Результаты для щелочного белка миелина
РИС. 11.28. Кинетика затухания анизотропии флуоресценции для человеческого сывороточного альбумина (а), щелочного белка миелина и нуклеазы (б).
(С разрешения авторов работы [ 50].)
существенно отличаются от двух ранее изложенных случаев. Для МВР затухание анизотропии очень быстрое с,о средним временем корреляции менее 1 не. Известно, что в водных растворах МБР находится в основном в бесструктурном состоянии.
Подобные результаты были получены при использовании другой методики изучения анизотропии с данным временем затухания (разд. 6.4). Измеряется стационарная анизотропия, причем времена затухания уменьшаются за счет тушения кислородом. Предполагается, что анизотропия г должна зависеть от времеии вращательной корреляции q> в соответствии с уравнением Перрена:
гдет - время затухания флуоресценции; г Q — анизотропия в отсутствие вращательной диффузии. Предполагается также, что график зависимости г”1 от т
должен быть линейным с. отсекаемым отрезком г"1 и наклоном (г ф)~1. Сегмен-
г о о
тальная подвижность триптофанового остатка проявляется при более коротком
измеренном времени корреляции, чем предсказанное уравнением (11.6). Кроме
того, сегментальные движения, слишком быстрые для того, чтобы они могли
Время затухания флуоресценции, не
РИС. 11.29. Графическая зависимость анизотропии с заданным временем затухания для человеческого сывороточного альбумина от времени затухания флуоресценции в отсутствие и в присутствии денатурантов [51].
быть зарегистрированы при кратчайших затушенных временах жизни, выявляются из пониженного кажущегося значения г получаемого при экстраполяции к т = 0. Анизотропия при заданных временах затухания для IISA приведена па рис. 11.29 [ 51]. В согласии с данными кинетических измерений было найдено, что триптофановые остатки неподвижны при низкой температуре (9 = 45 нс при 4°С) и эти же остатки довольно быстро вращаются при 44°С (ср - 8,5 не). Денатурация fISA гуанидипгидрохлоридом приводит к значительному понижению времени корреляции. Отметим, что в дополнение к уменьшению времени корреляции значение г получаемое 'экстраполяцией, меньше в денатурированном белке. Это объясняют очень быстрыми движениями триптофанового остатка, которые пе могут быть зарегистрированы при кратчайших затушенных временах жизни.
Анизотропии с заданным временем затухания дляМВР и моиеллипа показаны на рис. 11.30. Для обоих белков кажущееся время корреляции меньше, чем следует ожидать для вращательной диффузии белка как целого. Па высокую сегментарную свободу триптофановых остатков указывает также большое значение отсекаемого отрезка па оси у (г-1). Следовательно, измерения как кинетики анизотропии, так и анизотропии с заданным временем затухания показывают, что сегментальные движения триптофановых остатков происходят в разных белках.
о 0,02 М фосфатный буфер 6,08 -.«0,1 М ацетатный буерар 6,7В
Монеллин, 25°С %, нс
Время затухания флуоресценции, Не Врпмя затухания флуоресценции, нс
РИС. 11.30. Графическая зависимость анизотропии с заданным временем затухания от времени затухания флуоресценции для щелочного белка миелина (а) и монеллина (б) [51].
Имеющиеся в настоящее время данные недостаточны для обобщающих выводов о средней сегментальной свободе триптофановых остатков в белках. Тем не менее кажется очевидным, что такая свобода варьируется в белках, и, следовательно, вероятно, она различается для разных остатков триптофана в одном и том же белке. Например, оба триптофановых остатка в алкогольдегидрогена-зе из печени лошади оказываются неподвижными по отношению к белковой матрице [39, 51]. В качестве гипотезы было принято, что сегментальная свобода триптофановых остатков может коррелировать со степенью их связанности водородными связями в белковой матрице. Известно, что малые молекулы в растворе вращаются быстрее, чем можно ожидать на основании их молекулярных объемов, и что образование водородной связи с растворителем устраняет такое избыточное вращение [ 52]. Точно так же несвязанные индольные остатки могут проявлять избыточную сегментальную подвижность в белках. Подобные соображения приводят к неожиданному предсказанию, что триптофановые остатки, погруженные в неполярные области белков, могут быть более подвижны, чем остатки вблизи более полярной поверхности раздела вода - белок.
11.6.3. Зависимость времен затухания флуоресценции триптофана от длины волны
В заключение, раздела о динамических свойствах белков мы опишем известную зависимость времени затухания флуоресценции от длины волны. Напомним, что когда скорость дипольной релаксации сравнима со скоростью ио
Предыдущая << 1 .. 130 131 132 133 134 135 < 136 > 137 138 139 140 141 142 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама