Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 14

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 8 9 10 11 12 13 < 14 > 15 16 17 18 19 20 .. 185 >> Следующая

РТУТНЫЕ лампы низкого Давления дают очень узкие линии спектра ртути, которые используются главным образом для целей градуировки.
Детали такой процедуры описаны в разд. 2.3.1.
2.3. Монохроматоры
Монохроматизация светового потока в большинстве спектрофлуоримет-ров осуществляется не с помощью призм, а дифракционными решетками.
В технических условиях работы на монохроматоре указываются дисперсия и уровень рассеянного света. Дисперсия чаще всего приводится в нм/ мм, когда ширина щели выражена в миллиметрах. При выборе монохроматора для флуоресцентной спектроскопии нужно обращать внимание на то, чтобы уровни рассеянного света были низкими, тем самым уменьшаются помехи от рассеяния света. Кроме того, монохроматор должен иметь высокую эффективность, благодаря чему увеличивается возможность измерения слабых световых потоков. Разрешающая сила обычно имеет второстепенное значение, поскольку ширина линий в спектрах испускания редко бывает меньше 5 нм. Ширину щелей обычно можно менять, и типичные монохроматоры имеют две щели: входную и выходную. Интенсивность света, проходящего через монохроматор, приблизительно пропорциональна квадрату ширины щели. Более широкие щели повышают уровень сигнала и, таким образом, отношение сигнал/шум. При меньших ширинах щелей повышается разрешение, но при этом уменьшается интенсивность света. Если возможно фотообесцвечивание образца, его можно свести к минимуму уменьшением светового потока. Фотообесцвечивание можно также свести к минимуму легким перемешиванием образца, поскольку освещается только часть образца и обесцвеченная его часть непрерывно заменяется новой порцией.
Решеточные монохроматоры могут иметь плоские или вогнутые решетки. Плоские решетки обычно изготовляют механическим способом, и некоторые штрихи в них имеют дефекты. Вогнутые решетки делают с помощью голографии и фоторезистов; дефекты при этом сравнительно редки. Дефекты
Длина Волны, нм
РИС. 2.5. Эффективности решеток с максимальным блеском при 300, 500 и 1000 нм.
решеток - это основной источник рассеяния света в монохроматорах и побочных изображений. По этой причине для флуоресцентной спектроскопии предпочтительнее голографические решетки. Однако для измерений анизотропии флуоресценции чаще выбирают плоские решетки (см. рис. 2.6). Эффективность пропускания решеточных монохроматоров является функцией длины волны (рис. 2.5). При механическом производстве решеток эффективность для данной длины волны можно максимально увеличить подбором угла блеска, который определяется формой и углом инструмента, применяемого при изготовлении решетки. Подбором этого угла можно достичь максимальной эффективности в данной области длин волн, но при этом для других длин волн эффективность будет меньше. Обычно выбирают монохроматор возбуждения с высокой эффективностью в ультрафиолетовой области, а монохроматор испускания - в видимой области спектра. Поскольку голографические решетки изготавливают другим способом, они не имеют угла блеска, но форму штрихов можно менять. Как правило, максимальная эффективность пропускания таких решеток меньше, чем плоских, но они более эффективны для работы в широкой области спектра, чем плоские решетки.
Важной характеристикой решеточных монохроматоров является зависимость эффективности пропускания от поляризации света, показанная на рис. 2.6 для плоской и вогнутой решеток. Вследствие этого наблюдаемые интенсивности флуоресценции могут зависеть от поляризации испускаемой флуоресценции. Кроме того, спектр испускания образца может быть сдвинут по длинам воли и иметь измененную форму в зависимости от того, при каких условиях поляризации произведена запись. Рассмотрим, например, спектр испускания, записанный с одним и тем же типом решетки, но с помощью поляризатора, ориентированного вертикально (II) и горизонтально
(1) (рис. 2.6). Спектр, полученный с помощью вертикально ориентированного поляризатора, должен быть смещен в сторону коротких длин волн по сравнению со спектром, полученным при использовании поляризатора в горизонтальном положении. Причиной является то, что эффективность пропускания для вертикально поляризованного света выше на коротких длинах волн. Такой спектральный сдвиг можно наблюдать независимо от образца и от того, поляризовано или нет испускание.
В качестве другого примера для иллюстрации этого факта на рис. 2.7 приведен спектр испускания И-ацетил-Ь-триптофанамида (NATA). Это соединение является производным триптофана, и его можно рассматривать для иллюстрации спектров испускания, ожидаемых для белков (гл. 11). Возбуждающий свет поляризован вертикально, а спектр испускания записан с поляризатором, ориентированным вертикально (В) и горизонтально (Г). Эти спектры явно различаются. Как и ожидалось, спектр, наблюдаемый через вертикально ориентированный поляризатор, сдвинут в коротковолновую область по сравнению со спектром, наблюдаемым при горизонтальной ориентации поляризатора испускания. Дополнительный пик при 390 им обусловлен только пропускающей способностью монохроматора. Полученные результаты свидетельствуют о том, что можно сравнивать только те спектры, которые записаны в одинаковых условиях, в том числе и при одинаковой ориентации поляризаторов. Важно помнить, что если поляризация флуоресценции образца меняется, например вследствие изменения вязкости, то наблюдаемый спектр испускания может быть другим из-за зависимости эффективности пропускания от длины волны и от поляризации. Более того, вязкость и сама по себе может влиять на спектр испускания.
Предыдущая << 1 .. 8 9 10 11 12 13 < 14 > 15 16 17 18 19 20 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама