Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 158

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 152 153 154 155 156 157 < 158 > 159 160 161 162 163 164 .. 185 >> Следующая

4-2. Фазовые угпы детектора» равные 17e4 + 9СР и 32„1 — 90°в относятся к тем положениям, когда детектор находится в противофазе с DNS - BSA и DNS соответственно. Эго следует из того, что при <р^ = 17,4 + 9Сf наблюдается только флуоресценция DNS - BSA, а при <pD = 32„'1 - 90° - только флуоресценция DNS. В смеси DNS—BSA интенсивность фазочувствительной флуоресценции DNS уменьшена на 50%„ Следовательно, 50% молекул DNS связано с BSA. Аналогично при <р^ = 17„4 + 90° наблюдается только флуоресценция комплекса. По отношению к раствору, в котором DNS полностью связана„ интенсивность составляет 50%. Следовательно, связано только 50% молекул DNS.
Интенсивности фазочувствительных спектров первых двух растворов можно объяснить следующим образом. При добавлении насыщающих количеств BSA все молекулы WS оказываются связанными. Таким образом,, их вклад в сигнал при ф^= 32,1 ~ 90° лик» видируется. Интенсивность увеличивается в два раза,, и теперь можно наблюдать флуоресценцию при = 17,4 + 90°. Однако увеличение интенсивности в два раза реально не наблюдается,, поскольку сигнал от связанной DNS демодулирован сильнее,, чем от свободной DNS „ Точнее, эти значения равны 0*954 и 0*847 для 5 и 10 не соответственно Г уравнение (4.,2)]. Следовательно,, ожидаемое увеличение интенсивности в два раза уменьшается на коэффициент 0„847/0u954 = 0и888„
Г пава 5
5-1. В соответствии с уравнениями (5.48) и (5„51)
/1 -±\ = Д- -'-)J + j(J--!.)_??!_ ,5.85)
'Р з' \ з / ' PQ з ' л v
где d — фактор деполяризации,, связанный с сегментальной подвижностью зонда:
d “------------- (5.66)
3 соя Р - 1
Следовательно,, график зависимости (1//* - 1/3) от Т/г\ дает (1/fQ — 1/3)rf и (1/fQ _ -\/3)dRt/V в виде отсекаемого отрезка и наклона соответственной Из данных рис„ 5,15 получаем следующее:
Отсекаемый отрезок Наклон, Наклон/отсекаемый от-
Т,°С 1 /Р 1/Р-1/3 10~5 К”? г^ом-с резок„ 10-6 К-1-1—i1 см - с
10 2,51 2,18 1,20 5,50
20 2,59 2,26 1,18 5,22
35 2,73 2,43 1,12 4,61
45 2,85 2,52 1,08 4,30
При делении наклона на отсекаемый отрезок d сокращается и получаем выражение: Наклон /iT
--------------------(5.67)
Отсекаемый отрезок V
Следовательно, может быть вычислен объем молекулы IgG:
У, ° С 10 20 35 45
V, см3/моль 151000 159 000 180000 193 000
Принимая молекулярную массу равной 150000 и плотность 1,2 г/см3, получаем объем 125000см3/моль. Так как молекула IgG не имеет сферической формы, то представляется разумным, что ее кажущийся объем должен быть больше, чем вычисленный. Более того, при вычислении объема не учтена гидратация.
Мы предположили, что при 10°С дансильная область не обладает избыточной подвижностью, кроме той, которая связана с общим вращением белка. Следовательно, при этой температуре отсекаемый отрезок равен (1 /Р0 — 1/3). Отношение отсекаемого отрезка при более высокой температуре к отсекаемому отрезку при 10°С равно d. Преобразование уравнения (5.66) дает
cos2p = (2d-1 + 1)/3 (5.68)
и, следовательно, значение р. Таким образом, видно, что степень внутренней подвижности возрастает на 18° при увеличении температуры от 10 до 45°С:
о Отношение отсекаемых cos2 (3 Р
О отрезков
10 1,0 1,00 0
20 1,037 0,976 8,87
35 1,115 0,931 15,20
45 1,156 0,910 17,5
5-2 Наблюдаемую поляризацию можно перевести в единицы анизотропии, используя г = 2IJ/(3 — Р). Последнее удобнее, поскольку
г - А;вобгсвоб +4вязгсвяз (5.69)
где индексами отмечены свободная и связанная формы флуорофора, а /. — доля флуоресценции, соответствующая каждой форме зонда. Когда [ BSA] = 0, регистрируется гсвоб- а хогяа tBSA]» Кдисс' регистрируется гсвяз:
[BSA] Регистриру- г
емый параметр
® гсвоб 0,010
2-10"5М ' 0,200
гсвяз 0,300
Используя уравнение (5.69), получаем
°-20 = /своб (°-01) + - /своб> (°*3°) (5-7°)
и, следовательно, /своб = 0,345, а /свпз = 0,655. Так как концентрация DNS намного меньше, чем BSA, можно принять, что концентрация несвязанного BSA не зависит от связывания с DNS. Отношение свободной DNS к связанной равно 0,345/0,655. Следовательно, из уравнения (5.63) находим
„ _ (2-10“5М) (0,345) ,
^пИСС- -------------------- = 1,05-10~5 М (5.71)
ДИСС (0,655)
б) При использовании уравнения (5.69) предпопагалось, что вычисленные доли интенсивности каждой формы соответствуют доле связанной или свободной DNS. Однако если относительный квантовый выход связанного зонда в два раза больше, чем свободного, то ясно, что концентрация связанной формы в два раза ниже. Следоватепьно,
Предыдущая << 1 .. 152 153 154 155 156 157 < 158 > 159 160 161 162 163 164 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама