Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 159

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 153 154 155 156 157 158 < 159 > 160 161 162 163 164 165 .. 185 >> Следующая

Л с = |2'1°-~,M.)-(0-?-4-L .2.1-КГ* М (5.72)
АИС (0,655)/2
в) Изменение квантового выхода может быть легко обнаружено при сравнении интенсивности раствора DNS в присутствии и в отсутствие BSA . Так как концентрации DNS идентичны, относительные интенсивности соответствуют относительным квантовым выходам.
г) Используя данные, приведенные для вычисления времени вращательной корреляции HSA, находим, что оно равно 20 не. Анизотропия DNS будет затухать слишком быстро, для того чтобы можно было ее измерить на обычном оборудовании. Для растворов, содержащих BSA в концентрациях, достаточных для связывания всей DNS, предполагаем, что
r[t) = 0,20f“t/20 (5.73)
Для раствора с концентрацией 2’10“5M
=/свяЗг0п“'/2° = 0,131 e^/2° (5.74)
5-3. Используя условие задачи 5-3, можно составить таблицу (табп. 5.4), в которой перечисляются времена корреляции для каждого мономера и димера и предполагаемые анизотропии для каждого маркированного белка. И флуоресцеин, и дансип подходят для количественной оценки димеризации рибонуклеазы, так как следует ожидать приблизительно одинаковых изменений в анизотропии (0,05). Видно, что процентное изменение для рибонуклеазы, маркированной пиренбутиратом, больше (89%), но фактическое изменение анизотропии при димеризации мало (от 0,008 до 0,016). Г!о тем же соображениям флуоресцеин или дансил должны подходить для измерения димеризации химотрипсина.
Для IgG максимальная чувствительность к димеризации должна наблюдаться с белками, маркированными пиренбутиратом.
5-4. а) Долю лумазина, связанного при 4°С, можно найти, используя значения анизотропии из уравнения (5.58) с г - 0,039, гсвяз = 0,153; гсвоб= 0,003 и R = 1,5. Получаем /связ = 0,179. Подстановка в уравнение (5.59) дает ^дисс = 0,343 мкМ,
б) Время вращательной корреляции можно рассчитать по уравнению (5.33). Используя уравнение (5.4), вычисляем, что значение PQ = 0,45 соответствует г0 = 0,353. Подставляя г = 0,153 при 4°С, находим время вращательной корреляции, равное 9,4 не.
в) Если весь лумазин был связан с белком, следует ожидать
г (О = r0e-*/(P (5.75)
где rQ = 0,353 и ф = 9,4 не. Однако для этого раствора ранее было вычислено, что только 17,9% лумазина связано с белком (/связ = 0,179). Время затухания анизотропии свободного лумазина значительно меньше, чем 1 не, и, таким образом, ненаблюдаемо. Кинетика затухания будет отражать только вращательную диффузию белка как целого:
Ответы на задачи Таблица 5.4. Вычисленные значения к задаче 5оЗи
Белок <р, НС
Мономер (М) Димер (Д)
Рибонукпеаза 5,81 11,6
Химотрипсин 10,4 20,8
IgG 68,9 137,7
Анизотропии3
Флуоресцеин Дансип Пиренбутирип
Рибонуклеаза М 0,213 (1,26) 0,110(1.46) 0,008(1,89)
Д 0,268 0,161 0,016
Химотрипсин М 0,260(1,16) 0,153(1,33) 0,014(1,80)
Д 0,302 0,203 0,025
IgG М 0,340(1,03) 0,262(1,07) 0,061 (1,42)
Д 0,350 0,280 0,087
а Числа в скобках - отношение анизотропии димера к анизотропии мономера.
г(г) = (0,179) (0,353)е-*/9.ч (5>76)
Присутствие свободного пумазина приводит к понижению кажущейся анизотропии пои t - 0 от 0,353 до 0,063.
5-5. Для а, # О
'0«1 г0а2
----------- + (5.77)
1+(т/Ф1) 1+(т/ф,)
Г лава 6
6-1. а) Поправочный коэффициент 1\\ /1\ равен 1,35/0,45 = 2,95. Следовательно, ио-пользуя уравнение (5.33), находим rQ = 0,394. Уравнение (5.3) дает Р0 = 0,494.
б) Угоп между диполями поглощения и испускания может быть вычислен из уравнения (5.20):
Подстановка г() = 0,394 дает а = 5,7' .
в) Для DPII в ПМРС анизотропия равна 0,190. Для незатрудненной модели эта анизотропия связана со скоростью вращения выражением
гп/г = 1 + 6 Л’т (6.48)
Подстановка г() = 0,394, г - 0,190 и т 10нс в (Ь-48) дает R - 1,8-107 с. Используя Ф = (6/?)”1. вычисляем ф - 9,3 нс. Среднее угловое смещение флуорофора определяется уравнением (5.45). Подстановка г(| " 0,394 и г = 0,190 дает у = 36°.
г) Уравнение (6.46) пригодно для случая затрудненного флуорофора. После преобразования получаем
(г(| - г)/(г - Г ^ - 8/» (Ь.49)
Следовательно, Л' ~ ft.tvlU с и ф - о нс. Угол у идин и ют же независимо or принятой модели. Вычисление у является просто интерпретацией измеренной анизотропии.
Предыдущая << 1 .. 153 154 155 156 157 158 < 159 > 160 161 162 163 164 165 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама