Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 16

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 10 11 12 13 14 15 < 16 > 17 18 19 20 21 22 .. 185 >> Следующая

Теперь обсудим эффективность монохроматора испускания. Обычно флуорофоры поглощают очень небольшую часть возбуждающего света, а квантовые выходы флуоресценции могут быть невелики. Случаи, когда сигнал флуоресценции в 1000 раз менее интенсивен, чем возбуждающий свет, довольно распространены. Пусть, например, исследуются мутные суспензии мембран для наблюдения флуоресценции связанных с этими мембранами белков. Длины волны возбуждения и испускания должны быть около 280 и 240 нм соответственно. Посклъку монохроматор испускания пеидеален, некоторое количество рассеянного света с длиной волны 280 им может пройти через монохроматор испускания, установленный на'длину волны 340 нм. Предположим, что монохроматор испускания, установленный на 340 нм, пропускает свет с длиной волны 280 нм с коэффициентом 10-4. Интенсивность рассеянного света с длиной волны 280 нм легко может в 1000 раз превысить интенсивность испускания флуоресценции с длиной волны 340 им. Следовательно, 10 % излучения, которое мы принимаем за флуоресценцию, может в действительности быть рассеянным: возбуждающим светом. Важно также помнить, что рассеянный свет сильно поляризоваи (обычно на 100%). Таким образом, из-за высокого уровня рассеянного света измерения анизотропии флуоресценции часто затрудняются или становятся невозможными.
Во всех экспериментах по измерению флуоресценции важно исследовать контрольные образцы, которые во всем идентичны исследуемым образцам, но не содержат флуорофора ("холостой" опыт). Такие образцы позволяют оценивать рэлеевское и комбинационное рассеяние и устранять их влияние.
Кроме того, при проведении "холостого" опыта можно обнаружить присутствие флуоресцирующих примесей. При исследовании контрольных образцов необходимо иметь в виду, что рассеянный свет полностью поляризован. Важность этого фактора иллюстрирует рис. 2.7, на котором приведены спектры испускания NATA. Для увеличения интенсивности рассеяниого света в опыте было добавлено небольшое количество гликогена. Спектры испуска- a ния записаны при вертикальной и горизонтальной ориентации поляризатора испускания. Рассеянный возбуждающий свет хорошо заметен, когда поляризатор ориентирован вертикально. Напротив, почти никакого рассеянного света не наблюдается при ориентации поляризатора в горизонтальном направлении. Отсюда можно сделать несколько выводов. Предположим, что проводятся измерения анизотропии флуоресценции. Если спектры "холостых" проб рассматривают при горизонтальной ориентации поляризатора испускания, можно ошибочно заключить, что количество рассеянного света незначительно. При проведении измерений в присутствии рассеянного света лучше всего ставить оба поляризатора в вертикальное положение, чтобы можно было заметить,
есть ли мешающий сигнал. Наоборот, горизонтальную поляризацию пучка испускаемого света можно использовать для уменьшения влияния рассеянного света в том случае, если необходимо измерить только спектры испускания.
Голографические решетки устраняют рассеянный свет лучше, чем линованные. Ясно, что большое значение имеют дефекты решеток, приводящие к побочным изображениям, которые могут выходить из монохроматоров.
В случае использования голографических решеток таких изображений меньше, поскольку эти решетки совершеннее. Кроме того, в монохроматорах с голографическими решетками меньше отражающих поверхностей. Это связано с тем, что решетка может также работать как линза, и для фокусировки не требуется больших вогнутых зеркал. При меньшем числе отражающих поверхностей вероятность прохождения рассеянного света через монохроматор уменьшается.
градуировка монохроматоров. Градуировку монохроматоров по длинам волн надо проводить регулярно, особенно для тех монохроматоров, где "градуировку" осуществляют с помощью электроники, а не путем прямого механического соединения. Для градуировки применяют ртутные пальчиковые лампы. Ртутную лампу низкого давления изготавливают в форме цилиндра диаметром 5 мм. Такие лампы хорошо входят в кюветное отделение. Для того, чтобы стационарно установить лампу, используют металлический блок, в который плотно входит лампа. Этот держатель имеет те же размеры, что и кювета. На одной из его сторон есть диафрагма, которая позволяет ограничивать световой поток, попадающий в монохроматор испускания. Для того чтобы повысить точность определения длины волны и уменьшить интенсивность света, устанавливают небольшую ширину щели. Важно ослабить световой поток, чтобы не повредить фотоумножитель и/или усилитель. После выполнения указанных предосторожностей устанавливают наиболее сильные ртутные линии, используя монохроматор испускания. Измеренные длины волн сравнивают с известными величинами, которые приведены в табл. 2.1. Если наблюдаемые значения отличаются от табличных на постоянную величину, градуируют монохроматор еще раз до получения совпадения. Более серьезные проблемы возникают, если шкала длин волн нелинейна, т. е. измеренные длины волн отличаются от приведенных в таблице на величину, которая зависит от длины волны. В этом случае монохроматор обычно возвращают изготовителю для переделки.
Предыдущая << 1 .. 10 11 12 13 14 15 < 16 > 17 18 19 20 21 22 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама