Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 22

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 16 17 18 19 20 21 < 22 > 23 24 25 26 27 28 .. 185 >> Следующая

Фронтальное освещение часто осуществляют, используя либо треугольные, либо квадратные кюветы, ориентированные под углом 45° по отношению к падающему свету (рис. 2ДЗ, г - е). По нашему мнению, такое расположение неприемлемо, так как большое количество света отражается при этом прямо в монохроматор испускания, увеличивая вероятность того, что побочный свет будет мешать измерениям. Когда необходимо фронтальное освещение, мы предпочитаем ориентировать освещаемую поверхность под углом около
РИС. 2.13. Различные способы освещения образца для наблюдения флуоресценции.
в
30° к падающему свету* Такой способ имеет два преимущества. Во-первых, меньше отраженного света попадает в монохроматор испускания. Во-вторых, падающий свет распределяется по большой площади поверхности, поэтому точное расположение кюветы внутри держателя не играет существенной роли. Одним из неудобств такой ориентации является уменьшение чувствительности измерений из-за того, что большая часть падающего света отражается от поверхности кюветы.
Необходимо учитывать, что интенсивность флуоресценции пропорциональна концентрации лишь в ограниченном диапазоне оптических плотностей. Рассмотрим кювету 1x1 см, которую освещают по центру, а наблюдение ведут под прямым углом (рис. 2ЛЗ, б). Предположим далее, что оптическая плотность при длине волны возбуждения равна 0,1. Из определения оптической плотности (lg,/0// в D) следует, что интенсивность света в центре кюветы (/) равна 0,88 /0, где Iq - интенсивность света, подающего на кювету* Поскольку наблюдаемая интенсивность флуоресценции пропорциональна интенсивности падающего света, кажущийся выход будет примерно на 10% меньше, чем наблюдаемый для бесконечно разбавленного раствора. Этот эффект называется эффектом внутреннего фильтра. Такие эффекты могут уменьшить либо интенсивность возбуждения в точке наблюдения, либо наблюдаемую флуоресценцию из-за того, что часть ее поглощается. Относительный вклад каждого из процессов зависит от оптических плотностей образца на длинах воли возбуждения и испускания.
Для иллюстрации влияния оптической плотности на интенсивность флуоресценции на рис. 2.14 представлены данные для хиниисульфата» Измеряемая интенсивность пропорциональна оптической плотности только до значения D = 0,05. Линейную область этой зависимости для интенсивностей флуоресценции можно расширить, используя нецентральное облучение, которое уменьшает эффективный путь света. Поправки на величину эффекта внутреннего фильтра можно внести следующим образом. Предположим, что образец имеет значительную оптическую плотность как при длин© волны возбуждения, так и при длине волны испускания (D0o3fi и DHCn соответственно). Зна-
11
XuHUHcyjtbtpam в 0,1н. H2SO/(
О
0,1 о,? 0,3 О//
Оптическая плотность при Л -З'/в нм
РИС. 2.14. Влияние оптической плотности на интенсивность флуоресценции хи~ нинсупьфата.
1 - измеренные интенсивности; 2 ~ исправленные интенсивности, вычисленные по уравнению (2,4) с ?>исп -• О.Эти данные попучены для кюветы 1 х 1 см2 при цент-
оальном освещении.
чения оптических плотностей ослабляют интенсивности возбуждения и испускания на К)4*^036 и 10_wDKcn соответственно. Исправленная интенсивность флуоресценции в этом случае приблизительно равна
Исправленные интенсивности для хииинсульфата показаны на рис. 2.14, из которого видно, что рассчитанные значения ложатся на прямую, являющуюся продолжением начального линейного участка экспериментально наблюдаемой кривой. Для нахождения точных поправок желательно иметь градуировочные кривые, которые строят, используя стандарты в условиях, близких к условиям текущих экспериментов.
Интересно отметить, что при фронтальном освещении интенсивность при больших оптических плотностях не зависит от концентрации [6]. При этих условиях весь падающий свет поглощается вблизи поверхности кюветы. Фронтальное освещение хорошо также использовать для измерения оптической плотности таких образцов, как суспензии макрочастиц [ 7] и гемоглобин [ 6]. В работе [ 6] указывается, что интенсивность пропорциональна отношению оптической плотности флуорофора к оптической плотности образца.
(2.4)
10"6М;
РИС. 2.15. Влияние самопогпощения на спектр испускания'антрацена.
Концентрации в этаноле:
2 - Ю~4М; 3 - 4 • КГ'1 М. Кювета 1 х 1 см2.‘ Наблюдение велось под прямым угпом.
Длина волны, нм
При использовании фронтального освещения полная оптическая плотность может быть очень велика (20 или больше), но уровень сигнала остается неизменным.
Высокие оптические плотности могут искажать спектры испускания. Например, когда наблюдение ведут иод прямым углом, коротковолновые полосы испускания антрацена избирательно уменьшаются (рис. 2.15). Это проио
РИС. 2.16. Влияние длины волны возбуждения на самопоглощение флуоресценции для 9,10-Дифенипантрацен.ц при фронтальном освещении излучением указанных длин вопи (по данным
Предыдущая << 1 .. 16 17 18 19 20 21 < 22 > 23 24 25 26 27 28 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама