Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 23

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 17 18 19 20 21 22 < 23 > 24 25 26 27 28 29 .. 185 >> Следующая

I в]).
390
Длина волны, нм
m ш
по
волновое число, см'
ходит потому, что испускание коротких длин волн поглощается антраценом.
У меньшение голубого края спектра испускания наиболее сильно проявляется для флуорофоров, у которых спектры поглощения и испускания сильно перекрываются. Флуорофоры с большим стоксовым сдвигом менее чувствительны к этому явлению.
При фронтальном освещении спектры испускания могут искажаться также и при высоких концентрациях. Например, спектр испускания 9, 10-дифенил-антрацена зависит от длины волны возбуждения (рис. 2.16). Если возбуждение происходит при 365 нм, коротковолновая часть спектра уменьшается, чего не наблюдается при длине волны возбуждения 265 нм. Оптическая плотность меньше при 365 нм, чем при 265 нм. В результате пучок возбуждающего света с длиной волны 365 нм глубже проникает в образец, при этом вероятность реабсорбции излучения люминесценции возрастает. Не существует простых и надежных методов точного определения величин концентрационных эффектов и введения поправок на них. Лучше избегать связанных с этим проблем, работая с разбавленными растворами.
2.9. Поглощение света и отклонения от закона Ламберта - Б ера
2.9,1. Поглощение света
Основным аспектом флуоресцентной спектроскопии является измерение поглощения света Для получения правильных результатов необходимо учитывать множество факторов, которые могут ввести в заблуждение экспериментатора. В этом разделе выводится закон Ламберта - Вера и указываются причины, вызывающие отклонения от него.
Рассмотрим тонкий слой раствора толщиной dx, содержащий п молекул/ см3 (рис. 2.17), и предположим, что а (см2) - эффективное сечение поглощения. Число фотонов dl, поглощенных в слое dx, пропорционально интенсивности падающего света/, а также а и п, где п ~ число молекул в Т см8: dl/dx =-/ а п. /2.5*
/
ч
РИС. 2.17. Схема, иллюстрирующая поглощение света.
d
После перегруппировки, интегрирования и подстановки граничных условий / »/0 при х ш 0 получаем
In А- » and, (2.6)
где d - толщина образца. Это и есть уравнение Ламберта - Вера, обычно используемое в несколько иной форме:
1 e-^-.,cd = D (2.7)
где е - молярный коэффициент поглощения (экстинкции) в М-1 - см-1*; с - концентрация, моль/л; D - оптическая плотность* Из уравнений (2.6) и (2.7) находим
а = 2,303бс/п, . (2*8)
Поскольку п » Ыс/ 10й, где N - число Авогадро, имеем а « 3,82 • 10”ме. (2.9)
Интересно подсчитать сечения поглощения для типичных ароматических соединений. Молярные коэффициенты поглощения антрацена равны 160 ООО и 6 300 моль-1 • см--1 для 253 и 375 нм соответственно. Эти значения соответствуют сечениям поглощения 6,1 и 0,2? Аа соответственно. Если принять, что сечение молекул антрацена равно 12 А2, видно, что при 253 нм антрацен поглощает ~ 50% фотонов, с которыми он сталкивается, а при 375 нм - 2% фотонов*
2.9.2. Отклонения от закона Бера
Согласно закону Вера, оптическая плотность прямо пропорциональна концентрации поглощающих частиц» Отклонения от закона Бора могут быть связаны как с природой исследуемых веществ, так и с прибором.
РАССЕЯНИЕ света. Биологические образцы часто мутны из-за наличия макромолекул или других больших агрегатов, рассеивающих свет. Оптическая плотность, вызванная рассеянием, пропорциональна 1/А4 (рэлеевское рассеяние), и, таким образом, ее легко можно определить как некое фоновое поглощение, быстро увеличивающееся при уменьшении длины полны.
*В системе СИ размерность десятичного молярного коэффициента поглощения м2 • моль”1, что в 10 раз больше исторически сложившейся и используемой практически во всех публикуемых работах курьезной размерности дм3 * моль-1 • см-1, содержащей две различные десятичные доли одной и той же единицы длины. — Прим, ред.
ФЛУОРЕСЦЕНЦИЯ. Если оптическая плотность образца велика, а поглощающие частицы флуоресцируют, испускаемое ими излучение может попасть в детектор, что вызовет отклонения от закона Вера; график будет отклоняться в сторону оси концентраций. Но поскольку побочная флуоресценция направлена во все стороны, тогда как падающий свет сосредоточен вдоль оси, ее влияние можно уменьшить, располагая детектор на определенном рао стоянии от образца.
АССОЦИАЦИЯ. Если растворимость поглощающих частиц невелика, они могут ассоциировать в растворах при высоких концентрациях. Спектры по)> лощения ассоциатов и мономеров могут различаться. Например, раствор распространенного красителя бромфенолового голубого при концентрациях порядка 10 мг/ мл имеет красный цвет, а при меньших концентрациях - голубой. В зависимости от длины волны, выбранной для наблюдения, отклонения от закона Вера могут быть либо положительными, либо отрицательными.
Описанные выше факторы обусловлены собственными свойствами образца. Несовершенства аппаратуры могут также привести к нелинейной зависимости оптической плотности от концентрации. Это в особенности спра: ведливо при больших оптических плотностях. Например, рассмотрим раствор индола с D = 5 при длине волны 280 нм. Для того чтобы измерить такую оптическую плотность, спектрофотометр должен очень точно регистрировать интенсивности/0 и I, Последняя в 10 “6 раз меньше, чем интенсивность падающего света IQ . Обычно интенсивность побочного света, пропущенного монохроматором, на тех длинах волн, где вещество не поглощает, больше, чем 1. Следовательно, невозможно надежно измерять большие оптические плотности, если не приняты все предосторожности, чтобы свести к минимуму побочный свет.
Предыдущая << 1 .. 17 18 19 20 21 22 < 23 > 24 25 26 27 28 29 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама