Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 33

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 27 28 29 30 31 32 < 33 > 34 35 36 37 38 39 .. 185 >> Следующая

Необходимо учитывать, что МСИ, полученные любым из этих методов, искажены сверткой со вспышкой лампы. Поэтому данные, полученные через короткие времена после возбуждения, содержат особенно много ошибок. Бранд с сотр. [ Р] описали метод получения истинных МСИ. Они применили такой способ к результатам, полученным методом счета единичных фотонов, но его в равной степени можно использовать при анализе данных, найденных стробоскопическим методом. Для выполнения такой процедуры необходимы автоматизация установки и компьютер.
Записывают кривые затухания флуоресценции при определенных длинах волн, выбираемых на разных участках всего спектра испускания. На рис. 3.11 показаны типичные кривые затухания для фосфолипидных везй-
Номер канала Время, не
Время, но Длина волны, нм
РИС, 3.11. Иллюстрации к расчету мгновенных спектров испускания. (С разрешения авторов работы [гТ И Academic Press, Inc.)
кул, помоченных флуоресцентным зондом 2-анилинонафталином, полученные для длин ноли -594, 409 и 435 нм \ 2]. 'Ь'п результаты можно интерпретировать следующим образом. При более коротких длинах ноли флуоресценция затухает как вследствие испускания, так и иол едет I» но смещении спектра испускания в сторону от длины полны наблюдения. В результате кажущаяся скорость затухании будет больше. Такое» более, быстрое затухание хорошо видно как из R(h, t), так и из выведенной импульсной функции отклика F(А, ? )* При больших длинах волн регистрируется испускаиио только тех молекул флуорофора, которые уже; отрелаксировали,и, следовательно, только тех, которые испускают через большие; промежутки времени после возбуждения. Таким образом, кажущаяся скорость затухании будет меньше*
Кривые затухания флуоресценции используют для получения импульсных функций отклика для каждой длины полны испускания /-'(A, f)* Применяют теоретическую функцию, являющуюся суперпозицией нескольких экспонент с пятью независимыми членами, и уравнения (3.25) - (3.27). Величинам ос; и т,- не; придают никакого физического смысла Их просто используют для того, чтобы точно представить экспериментальные данные. Полученные кривые /-'(A, f) приведены па рис. 3.11. Заметим, что теперь по оси х отложено время. Такая замена была произведена, поскольку эти функции являются производными импульсных функций отклика. Для наблюдаемого затухания время па оси х прямо но указано, поскольку конечная длительность вспышки лампы приводит к неопределенности нулевой точки отсчета времени. Важная особенность таких импульсных функций отклика - возрастание интенсивности, наблюдаемое для данных, полученных для большей длины волны (435 им). Такое увеличение, соответствует члену с отрицательным ггредэкснопепциальпым множителем (а,- ) в уравнении (3.20). Наличие же такого члена свидетельствует о том, что протекают некие процессы в возбужденных состояниях. Если бы образец обладал только свойством гетерогенности в основном состоянии, кинетические кривые за-4 тухания зависели бы от длины полны, по никакого увеличения интенсивности но наблюдалось бы (гл. 12).
Импульсные функции отклика на каждой длине волны испускания теперь подбирают по величине таким образом, чтобы они соответствовали спектру стационарного состояния, изморенному на этом же приборе. г)ту операцию проводят, определяя И{\):
//(А) ----Ш.-------- (3.33)
ПС
f /-’(A, t)dl
о
где /"’(А) - интенсивность в стационарном состоянии па длине волны А, а /'’(A, t) - импульсная функция отклика на той же. длине полны. Импульсные функции отклика, нормированные на спектр стационарного состояния, оп-
ределяются выражением
/(А,0 = W(A)F(A, t) ' (3.34)
Некоторые из таких подобранных по интенсивности функций приведены на рис. 3.11. Максимум испускания образца находится в области 409 нм, и, следовательно, импульсная функция отклика на этой длине волны имеет максимальную амплитуду. Па других длинах воли амплитуда стационарного состояния меньше, и таким же образом ведут себя подобранные интенсивности этих импульсных функций отклика. Более полный набор мгновенных спектров испускания для меченных TNS липидных везикул представлен на рис. 8.18.
И наконец, изображают спектры испускания в любой момент времени после возбуждения, выбирая сечения временной шкалы. Зависящие от времени смещения спектров трудно отчетливо представить себе, рассматривая полную совокупность данных. По этой причине МСИ нормируют к одной и той же интенсивности в максимуме (рис. 3.11; см. также рис. 8.19).
В начальные моменты времени наблюдается коротковолновый сдвиг' спектров, а затем они постепенно сдвигаются в сторону больших длин волн. Из анализа таких спектров можно получить информацию о временных зависимостях процессов, протекающих в возбужденных состояниях. В биохимических исследованиях скорости таких реакций используют для определения динамических свойств биополимеров.
Предыдущая << 1 .. 27 28 29 30 31 32 < 33 > 34 35 36 37 38 39 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама