Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 34

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 28 29 30 31 32 33 < 34 > 35 36 37 38 39 40 .. 185 >> Следующая

Недавно Бранд с сотр. описали другой метод анализа гетерогенных образцов 144]. Для таких образцов затухание флуоресценции каждой компоненты обычно не зависит от длины волны испускания. Предположим, что проводится детальный анализ закона затухания на некоторых длинах воли, где испускают оба флуорофораЕго результатом яеляетря определение индивидуальных времен затухания, после чего можно рассчитать спектр испускания компоненты, имеющей соответствующее время затухания. Полученные таким образом спектры называют спектрами с данным временем затухания. Метод требует проведения сложных расчетов, однако с его помощью можно рассчитывать спектры с данным временем затухания, ие измеряя кривых затухания на каждой длине волны. Это расширяет использование импульсных методов для анализа гетерогенных смесей.
3.6. Измерение времен затухания флуоресценции по фазовым
сдвигам и демодуляции
Сущность фазовых и, модуляционных измерений времен затухания флуоресценции сос'тоит в следующем. Образец возбуждают светом, интенсивность которого модулировала по синусоидальному закону (см. рис. 3.2).
Из-за того что испускание запаздывает по времени относительно поглощения, оно имеет задержку по фазе и демодулировано относительно падающего света. Задержку по фазе (<р) и степень демодуляции (т) можно исполь-
зовать для расчета времени затухания флуоресценции [ уравнения (3,6) и (3.7)1» Фазовый метод хронологически предшествовал импульсному: первый прибор для фазовой флуорометрии был создан Ганьола в 1926 г» [ 10].
В дальнейшем были разработаны различные фазовые флуорометры [ 13 - Kjl. Наиболее распространенными и имеющимися и продаже являются приборы, основанные на схеме, описанной Спенсером и Вебером [ 17]. В этом приборе использован ультразвуковой модулятор Дебая — Сирса [ 18] дли получения необходимого модулированного света, и регистрация происходит в режиме взаимной корреляции. Последнее упрощает конструкцию прибора и работу с ним, а также повышает точность и надежность измерений.
В предыдущих разделах было показано, как с помощью аппроксимации • можно получить истинный закон затухании, зпая экспериментально измеренную кривую затухапйя. Легкость интерпретации законов затухания повысила интерес к методам временного разрешения. В принципе закон затухания можно также получить из данных по фазовой модуляции: рассчитывают величины а; и т,- , входящие в уравнение (3.20), а затем уже экспериментатор решает, имеют ли они физический смысл. Для расчета закона затухания из фазовых и модуляционных данных необходимо использование нескольких частот модуляции. К сожалению, технические причины ограничивают создание приборов с варьируемой частотой модуляции. В большинстве используемых в настоящее время устройств число частот модуляции ограничено двумя или тремя фиксированными значениями. При благоприятных условиях измеренных на этих частотах величии 9 и m достаточно для того, чтобы получить компоненты затухания в гетерогенной системе [ 19, 20]. Основным ограничением для использования дополнительных частот модуляции является отсутствие подходящих модуляторов или модулированных источников света Выли описаны некоторые устройства с изменяющейся частотой [21, 22, 45J, но оии отсутствуют в продаже; кроме того, для них в основном требуются лазерные источники света. Когда появится возможность варьирования частоты модуляции, метод фазоной модуляции будет по крайней мере сравним с импульсными методами. Ситуация такая же, как при использовании пикосекундных лазеров для импульсных измерений. Технически это осуществить возможно, но пройдет еще несколько лет, пока такие приборы станут вполне доступными.
Фазово-модуляционные методы даже при использовании фиксированных частот имеют ряд преимуществ. С помощью фазового метода можно легко измерять короткие (субпапосекундные) времена затухания, которые трудно измерить, используя импульсные методы, поскольку длительность импульсов ламп составляет обычно 2 не. Фазовые и модуляционные измерения являются быстрыми: лишь секунды необходимы для получения данных. Для получения же кривых затухания импульсным методом необходимо значительно большее время. И наконец, новый метод, в котором осущестпля-
отся фазочувствительная регистрация флуоресценции, вероятно, повышает значение фазово-модуляционных методов для анализа гетерогенных образцов. Используя этот метод, при одной частоте модуляции можно непосредственно записать индивидуальный спектр испускания каждого из двух флуорофоров в их смеси (гл. 4), Потенциальные возможности такой методики еще предстоит реализовать, что в сочетании с возможностью применения варьируемой частоты привело бы к впечатляющим результатам.
Эта методика сравнима с расчетом спектров с данным временем затухания (разд. 3.5).
3.6.1. Модуляторы света
Модулированный свет можно получить различными способами. В первых приборах использованы ячейки Керра [ 10], модулированные лампы [ 11] и ячейки ПокелсаГ 12, 14]. Для работы ячеек Керра и Покелса нужная модуляция создается с помощью сильных электрических полей. Ячейки Керра не пропускают ультрафиолетового света, а при работе с ячейками Покелса необходимы сильно коллимированные пучки света. Высокие напряжения, необходимые для питания этих ячеек, часто мешают регистрации слабых сигналов флуоресценции. Для имеющихся в настоящее время ячеек Покелса нужно меньшее напряжение. Такие устройства пропускают ультрафиолет и могут работать при варьируемой частоте [ 451. Однако источники света должны быть сильно коллимированы, что достигается при использовании лазеров в качестве источников возбуждения. Применение лазерных источников приводит к ограниченному набору длин волн возбуждения.
Предыдущая << 1 .. 28 29 30 31 32 33 < 34 > 35 36 37 38 39 40 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама