Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 39

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 33 34 35 36 37 38 < 39 > 40 41 42 43 44 45 .. 185 >> Следующая

Для измерения времен затухания нужно выбирать фотоумножители с минимальным "цветовым эффектом". Поскольку этот эффект вызван различием траекторий электронов, логичнее всего попытаться такое различие уменьшить. Это осуществляют двумя путями. Во-первых, фотоумножитель должен быть сконструирован так, чтобы можно было приложить высокую
разность потенциалов между фотокатодом и первым динодом, причем ое надо постоянно поддерживать па постоянном высоком уровне - например, используя диоды вместо резисторов. В этом случае эжектируемые электроны очень быстро ускоряются на пути к первому диоду, что уменьшает влияние различия в их траекториях. Во-вторых, в некоторые фотоумножители встраивают магнитные линзы, чтобы регулировать полет электронов.
Путь более быстрых электронов к первому диподу удлиняется, что примерно уравнивает времена пролета для всех электронов. Фотоумножители, в которых приняты такие меры предосторожности и цветовой эффект составляет только 50 пс для разности в длинах воли 100 нм, уже созданы.
3,8,1» Введение поправок на цветовой и/ или геометрический эффекты при измерении времен затухания
Разработаны методы введения поправок во временные зависимости данных, полученных с помощью импульсных флуорометров [ 29, 30]. Они включают умеренно сложные математические преобразования внутри и вне временного интервала. Эти методы не получили широкого распространения.
Кроме того, при их использовании надо получать больше данных и проводить больше расчетов. По существу, необходимо установить тот факт, что для стандартного соединения получаются приемлемые результаты (см. разд.3.9). Если это не так, надо регулировать оптику и/или электронные устройства ФГ)У таким образом, чтобы зависящие от длины волны сдвиги не превышали 0,2 не. Бранд и др. [ 31] использовали простые поправки первого порядка. Они предположили, что профиль вспышки лампы сдвигается во времени как целое из-за влияния цветового и/ или геометрических факторов. Используя стандартное вещество с известным временем затухания, варьируют временное смещение вспышки до тех пор, пока не достигнут минимального значения х2. При этом требуемые смещения обычно составляют ~ 0,1 пс.
Значительно легче вводить поправки на указанные эффекты при измерениях фазово-модуляционными методами. Длину волны наблюдения подбирают, используя эталонные соединения. Зная времена затухания флуоресценции этих соединений, рассчитывают фазу и степень модуляции падающего света, теперь ужо не зависящие от описанных выше артефактов. Подобные "обратные" расчеты не были описаны для преобразования профиля вспышки лампы, полученного в виде сигнала от эталонного соединения.
Вместо обычных рассеивающих свет растворов можно применить стандартные флуорофоры с известными временами затухания [ 27]. Такие стандартные растворы позволяют получать сигналы, для которых известны соотношения между фазой и степенью модуляции возбуждающего пучка света, и тем самым избежать обычных проблем, встречающихся при использовании рассеянного света Флуоресценцию как стандарта, так и образца наблюдают
через интерференционный фильтр или через монохроматор, благодаря чему сравнение этих двух сигналов незначительно меняет распределение по длинам волн, регистрируемое с помощью фотоумножителя. И наоборот» сравнение рассеянного света с флуоресценцией приводит к значительным различиям в наблюдаемых длинах волн и полосах пропускания. Более того, ио пользование флуоресценции вместо рассеянного света уменьшает разницу в пространственном распределении, которая возникает при сравнении флуоресценции и рассеянного света [ 37] и приводит к ошибкам, связанным с освещением различных участков фотокатода. Измеренные величины фазового угла и степени модуляции для эталонного образца, а также известное значение его времени затухания используют для расчета фазы и степени модуляции возбуждающего пучка света.
Из-за того что образец сравнения имеет конечное время затухания, наблюдаемая разность фаз (фнабл) будет меньше той, которую наблюдают в случае рассеянного света. Эту разность фаз можно исправить, зная сдвиг фаз, обусловленный временем затухания эталонного флуорофора (тй). Фазовый угол для эталонного раствора <рл, рассчитанный из известной величины времени затухания [ уравнение (3.6)], используют для расчета реальной величины фазового угла <р для образца:
Фнабл+Фк (3.55)
На основе исправленного значения фазового угла рассчитывают затем фазовое время затухания исследуемого образца (тР). Аналогично степень модуляции для исследуемого образца, измеренная относительно флуорофора сравнения (тнабп), будет больше той, которая получилась бы при использовании рассеянного света. Это происходит потому, что сигнал от образца сравнения сам демодулирован. Исправленное значение степени демодуляции определяется выражением
т~ шнабл^ + С°2'тк)-М (3.56)
После этого степень демодуляции включают в расчет модуляционного времени затухания [ уравнение (3.7)]. Обе поправки можно вводить автоматически, задавая единственное значение для tr.
Предыдущая << 1 .. 33 34 35 36 37 38 < 39 > 40 41 42 43 44 45 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама