Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 41

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 35 36 37 38 39 40 < 41 > 42 43 44 45 46 47 .. 185 >> Следующая

BDF,NS можно также растворять в 0,05 М фосфате,pH 7,8 ([Зб]).
небольшие ошибки в величине 9 приводят к большим ошибкам в расчетных значениях времен затухания (см. рис. 3.2). 9-Пианоантрацен - хороший стандарт для области средних значений времен затухания, поэтому для широко используемых частот модуляции (0 - 30 МГц) можно ожидать совпадения величин тР и тт. Аналогично при импульсных измереииях должна получаться единственная константа затухания.
Задачи
3-1. Зависимость фазовых и модуляционных измерений времен затухания от частоты. Предположим, что фазовый флуорометр может работать на трех частотах: 1, 10, и 100 МГц. Кроме того, предположим, что нужно измерить время затухания флуоресценции белка (около 2 не), связанной с белком DNS (-^20 не) и связанной с белком пиренмасляной кислоты ( ^ 200 не). Какая частота и какой метод (фазовый или модуляционный) дали бы наиболее точные результаты для каждого из образцов ?
а) Рассчитайте фазовый угол и степень демодуляции для каждого времени затухания и для каждой частоты.
б) Предположим, что измерения фазового угла проведены с точностью +1°, а степени демодуляции - с точностью ±0,01. Рассчитайте ожидаемый разброс для каждого образца при каждой из частот.
в) Укажите частоту и метод, выбранные для каждого образца.
3-2. Влияние рассеянного света н а измерения времен затухании. Предположим, что измеряют времн затухания флуоресценции связанного с мембраной белка, действительное времн затухания которого предполагается равным 4,0 не. Образец мутный и рассеивает 10% падающего на него возбуждающего света. Предположим, что о присутствии этого рассеянного света не подозревают и регистрируют его как испускание.
а) Предскажите значения величин фазового и модуляционного времен затухания, которые наблюдались бы при использовании частоты модуляции 30 МГц, и сравните эти величины со средним временем затухания.
б) Какой метод более чувствителен к присутствию рассеянного света?
в) Объясните гомогенность образца из измеренных значений времен затухания-
г) Предскажите вид импульсной функции отклика, которая должна получиться из обратной свертки с помощью метода наименьших квадратов. Предположите при этом, что нулевая компонента времени затухания представляет собой компоненту, с небольшим временем затухания т = 0,1 не.
3-3. Влияние гетерогенности в основном состоянии на измерения времен затухания. Предположим, что имеется смесь антрацена (4,2 не) и 9-цианоантрацена (11,8 не).
а) Предскажите вид закона затухания на длине волны, где вклад каждого флуо-рофора в интенсивность в стационарном состоянии составляет 50%.
б) Предскажите величины фазового и модуляционного времен затухания для частот модуляции 10 и 30 МГц, а также величину среднего времени затухания.
ГЛАВА4.
Фазочувствительный метод регистрации флуоресценции
Фазочувствительный метод регистрации флуоресценции (ФЧРФ), разработанный сравнительно недавно, перспективен1 для физических, химических и биологических исследований. Он основан на принципах, обсуждавшихся в гл. 3 (измерения времен затухания флуоресценции фазовыми и модуляционными методами). В данной главе будет рассмотрено применение метода для анализа образцов, гетерогенных в основном состоянии. В одной из следующих глав мы обсудим возможности изучения реакпий и возбужденных состояниях.
Как и при измерениях времен затухания флуоресценции методом фазового сдвига, образцы возбуждают светом, интенсивность которого модулирована по синусоидальному закону. Интенсивность флуоресценции регистрируют с помощью фазочувствителыюго детектора (задираемого усилителя). При этом селективно ослабляют сигнал от отдельных флуорофоров и зависимости от их времен затухания или, правильнее, от фазовых углов, измеренных па отношению к фазе модулированного возбуждающего света* Можно, используя метод ФЧРФ, подавить испускание одного какого-либо вида частиц или, точнее, подавить испускание с каким-либо определенным фазовым углом. Тогда регистрируется фазочувствительный спектр испускания остальных флуорофоров. Для двухкомпопентной смеси можно подавить испускание одного из компонентов, чтобы наблюдать спектр испускания только другого компонента. Этот способ экспериментально прост, и для его осуществления можно использовать имеющееся в продаже оборудование.
Фазочувствительная регистрация флуоресценции впервые была применена в биохимических исследованиях лишь недавно [ 1, 2]. Тем не менее совершенно очевидно, что возможности метода довольно широки. Сюда входят идентификация и выделение гетерогенной флуоресценции белков и мембран, количественные исследования реакций связывания макромолекул, а также изучение реакций в возбужденных состояниях и дипольпой релаксации растворителя. Со всеми этими явлениями часто встречаются при применении методов флуоресцентной спектроскопии в биохимических исследованиях, и в таких случаях очень полезно использовать метод фазочувстии- ' тельной регистрации флуоресценции.
Предыдущая << 1 .. 35 36 37 38 39 40 < 41 > 42 43 44 45 46 47 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама