Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 42

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 36 37 38 39 40 41 < 42 > 43 44 45 46 47 48 .. 185 >> Следующая

4,1. Теория фазочувствительного метода регистрации флуоресценции
В фазовом флуорометре образец облучают светом, интенсивность которого модулирована по синусоидальному закону с круговой частотой модуляции со (рис, 4.1,пунктирная линия). Известно, что независимо от сложности (подчиняется ли испускание одно-, много- или неэкспоненциальному закону) оно также будет меняться по синусоидальному закону, но будет
Возбуждение Г\ /"\
Подавление
(разы

А
-f
8
Испускание
А* В
Г\^Г\
/ * X 5 \
у ^
Подавление А
/
/
/
/ А
/ /
х \
га< Го
t \
\
\
\ \
ПодаВление В
/ /' +^° \ \ / j ~эо° \ \
JJ
/
\ \ ч
ч
s
ч
Фазочубстбительнь/е спектры флуоресценции 30° фв*фв-ЭОс

В \ /А \ В
А I 4
/
РИС. 4.1. Схематическое описание метода фазочуестеитепьной регистрации флуоресценции.
(С разрешения авторов работы [ 1] и KlHovior IliomctJiraJ Prows.)
сдвинуто на фазовый угол <р и демодулировано с коэффициентом m по отношению к возбуждающему свету (рис. 4.1, сплошная линия). Дли затухания, описываемого одиоэксгюнепциальпым законом, которое можно ожидать для чистых флуорофоров в жидком гомогенном окружении, время затухания флуоресценции т можно рассчитать, зная фазовые сдвиги и коэффициенты демодуляции. При этом используют следующие соотношения:
tgcp ¦ сот; m--~ (1 4 сойт2)~^ (4.1), (4.2)
Однако если образец представляет собой или смесь двух флуорофоров или один флуорофор, вступающий в возбужденном состоянии в одностадийную реакцию, закон затухания флуоресценции будет двухэкспоненциальным.. Многоэкснонепциальнью законы затухания могут появиться в случае многостадийных реакций, а еще более сложные законы затухания наблюдаются при континуальной релаксации. При этом все еще можно измерять фазовые углы и коэффициенты демодуляции, но эти величины, интерпретируемые с помощью уравнений (4.1) и (4.2), дают только кажущиеся, но не реальные времена затухания. В принципе величины <р и т, особенно измеренные при различных частотах модуляции, можно использовать для расчета истинных значений времен затухания и относительных интенсивностей флуоресценции испускающих частиц (см. разд. 3.7). Практически же измерения крайне сложны, и требуется большая точность измеряемых величия. Именно поэтому фазовые методы но использовались достаточно широко для изучения флуоресценции гетерогенных образцов.
Фазовый флуорометр, снабженный аппаратурой для фазочувствительной регистрации флуоресценции, может быть использовал для разделения гетерогенной флуоресценции. Рассмотрим образец, содержащий флуоресцирующие частицы одного вида с временем затухания т. При возбуждении синусоидально модулированным светом интенсивность флуоресценции будет меняться по закону
F{t) 1»- щ,тв\п(со? — <р) (4.3)
где mL — степень модуляции возбуждающего света; т- коэффициент де-
модуляции, обусловленный конечным временем затухания флуоресценции; со - круговая частота модуляции.
Фатчувствип'льный детектор дает прямой токовый сигнал, пропорциональный амплитуде модуляции и косинусу угла, равного разности фазовых углов детектораcpD и образца. Коли, используя фазочувствительную регистрацию, сканируют но спектру испускания, то наблюдают зависимость
F(A,9Z,)~ A/‘’(A)cor(9„ -q>) (4.4)
где Р{\) - спектр стационарной флуоресценции; А - длина волны; к - константа, в которую входят обычные сомножители, характеризующие образец и измерительную аппаратуру, а также постоянный множитель С по-
мощью уравнения (4.4) можно определить форму фазочувствительного спектра однокомпоиентиого раствора при различных фазовых углах детектора. Можно ожидать, что интенсивность спектра будет меняться как cos(<pD - ф), а спектральное распределение останется неизменным.
Предположим теперь, что образец представляет собой смесь двух флуо-рофоров (Л и В), времена затухания флуоресценции которых тА и тв но зависят от длины волны испускания (рис. 4Л). Для того чтобы при измерениях методом ФЧРФ спектры А и Вне налагались, фазовые углы (фл и фв) или времена затухания должны быть различными. Предположим, что та к тв. Зависимость флуоресценции от времени определяется выражением
F(A, t) = FA{l)mAsia{wt -фЛ) + FB(A)mBsto(coi -фв) (4.5)
где Fa (а) и Fb(a) - интенсивности, соответствующие компонентам А и Р при длине волны А в стационарном спектре. Важной характеристикой модулированного испускания является то, что оно представляет собой суперпозицию синусоидальных волн одной и той же частоты, ко с различными фазовыми углами, каждая из которых соответствует одному из флуорофоров (рис. 4.1). Модулированное испускание удобно исследовать с помощью фазочувствительного детектора или запираемого усилителя. Результирующий демодулированный сигнал можно записать в виде
Предыдущая << 1 .. 36 37 38 39 40 41 < 42 > 43 44 45 46 47 48 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама