Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 43

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 37 38 39 40 41 42 < 43 > 44 45 46 47 48 49 .. 185 >> Следующая

F(A, ф0) = Fa (А) тА сое(фй - фл) + FB(А)твcos (ф0 - фВ) (4.6)
Уравнение (4.6) иллюстрирует важное положение. Детектор фазы можно подобрать таким образом, что он будет находиться в противофазе
1 ф г- - ф?)| = 90° с испусканием любой компоненты. Для случая смеси флуорофоров детектор может находиться в противофазе с испусканием одного из компонентов смеси. Тогда результирующий фазочувствительный спектр содержит вклады только остальных компонентов смеси. В случае образца, представляющего собой, смесь двух флуорофоров, можно подавить флуоресценцию любого из компонентов смеси. Тогда записанный фазочувствительный спектр будет представлять собой стационарный спектр второго компонента, Это явление называется фазовым подавлением. Например, рассмотрим спектр частиц А (рис. 4.1)* Если Фо = фд + 90°, частицы А не дают вклада в фазочувствительный спектр. При таком фазовом угле фазочувствительный спектр определяется выражением
^(А, Фл + 90°) - FB(A) тввт(фв ~фл) (4.7)
Сканирование по длинам волн дает FB(д) _ стационарный спектр частиц В„ Наоборот, если фй = ф^ - 90°, имеем
F(h, фв - 90°) = Fa {Т\)тА вщ(фв ~ФЛ) (4*8)
Испускание частиц И подавлено, и сканировании по длинам волн испускания дает стационарный спектр /'Л(А) частиц /1.
Заслуживают упоминания некоторые аспекты фа*юного подавления спектров. Как уже было показано, для двухкомпонеитпой смеси подавление испускания каждого из компонентов приводит к ослаблению испускания другого компонента. Точнее, исходная модулированная интенсивность каждого спектра уменьшается пропорционально sin(<p -<р4). Следовательно, разделение спектров компонентов зависит лишь от разности фазовых углов между двумя испусканиями, а не от абсолютных величин чтих фазовых углов или времен затухания. Фазовое разделение спектров сильно затруднено, когда фазовые углы или времена затухания флуоресценции компонентов становятся одинаковыми. Очевидно, если <рй „ <р^( подавление испускания одного из компонентов приводит к одновременному подавлению спектра другого компонента. Необходимо также понимать, что спектр каждого из компонентов затем ослабляется пропорционально коэффициенту тпА или mg, которые связаны с временами затухания флуоресценции компонентов Л и В уравнением (4.2). Что означает что фазочувствитольный сигнал от частиц с большими временами затухания будет меньше сигнала от частиц с более коротким временем затухания. Если же хотят на основе фазочувствительных интенсивностей провести оценку количества каждого компонента в смеси, необходимо учитывать коэффициенты демодуляции [ 11].
Важно, что для смеси флуорофоров на основе выбранных фазовых углов можно рассчитать времена затухания флуоресценции частиц каждого вида. Если известен стационарный спектр одного из видов частиц, можно подобрать 9d таким образом, чтобы фазочувствитольный спектр наложился на стационарный спектр. Например, если известен FA (\)t можно выбрать Ф0 так, чтобы получить фазочувствительный спектр, перекрывающийся с /'л (А), Выбранный фазовый угол должен иметь разность фаз 90° с испусканием частиц В, и его можно использовать для расчета времени затухания флуоресценции этого вида частиц. Безусловно, с помощью обратной процедуры можно получить время 'затухания флуоресценции частиц А, В случае двухкомпонеитпой смеси метод фазочувотвительной регистрации флуоресценции позволяет определить времена затухания обоих компонентов смеси, если известии стационарный спектр одного из компонентов. Что минимальное требование; удовлетворяется во многих экспериментальных случаях.
Фазочувствительпую регистрацию флуоресценции легко осуществить на фазовом флуорометре, к которому при соединен запираемый ускоритель. Такие* приборы похожи на стационарные флуорометры, за исключением того, что в них имеются модуляторы света и устройства, позволяющие количественно определять фазовые углы и коэффициенты демодуляции (рис. 4.2). Обычно используют диапазон частот модуляции (i - 30 МГц, поскольку такие часто-
Вь/сока я частота
Ке
частота
гетеродина
ФазочубсмЗи-
тельный
детектор
МДС
ФОУ
Ст
РЛ
Фза
м
РИС. 4.2, Блок-схема фазового фпуорометра с фазочувствительным детектором.
Хе — ксеноновая пампа; М — монохроматор; МДС — модулятор Дебая — Сирса;
РЛ - устройство для расщепления светового луча; Ф — оптические фильтры; О — образец; ФЭУ — фотоумножитель; Ст - эталонный флуорофор. (С разрешения авторов работы [ 1 ] и Klsevier Biomedical Press.)
ты дают возможность измерять сдвиги фаз и коэффициенты демодуляции для образцов с типичными временами затухания, равными ~10 не [ уравнения (4.1) и (4.2)]. Во многих приборах значения <р и тне измеряют при таких высоких частотах. Лучше, чтобы коэффициент усиления фотоумножителя был модулирован с несколько иной частотой и результирующий взаимнокоррелированный сигнал содержал информацию об исходной фазе и модуляции (см. разд. 3.6.2). Во многих приборах частоты взаимной корреляции близки к 20 Гц. Однако фазочувстпительиая регистрация низкочастотных сигналов позволяет проводить разделение спектров, показанное на рис. 4.1. Ее легко осуществить, причем нет необходимости учитывать возможные искажения, вызванные настроенными высокочастотными контурами. Сигнал сравнения поступает в фазочувствительный детектор от второго фотоумножителя, регистрирующего испускание флуорофора сравнения (рис. 4.2). После выбора фазового угла детектора фазочувствительиые спектры получают обычным образом, сканируя испускание по длинам воли.
Предыдущая << 1 .. 37 38 39 40 41 42 < 43 > 44 45 46 47 48 49 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама