Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 44

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 38 39 40 41 42 43 < 44 > 45 46 47 48 49 50 .. 185 >> Следующая

4.2. Анализ гетерогенной флуоресценции с помощью метода
фазочувствительной регистрации
Одним из применений метода ФЧРФ является анализ образцов, содержащих несколько флуорофоров. Такие образцы часто встречаются при биохимических исследованиях (например, белки с двумя или более триптофане-
выми остатками). Белок, содержащий дна триптофановых остатка, можно легко смоделировать, ислюльзуи смесь индола и диметилиндола. Спектры испускания и времена затухания флуоресценции индола и диметилиндола различаются (рис, 4.3); подобная ситуация может иметь место в случае, когда триптофановые остатки находятся в различных областях молекулы болка. R выбранном растворителе времена затухания для индола и DMI составляют 9 и 2,5 не, тогда как максимумы испускания находятся около 306 и 323,им соответственно.
Для непосредственной записи спектров индола и DMI , находящихся в смеси, можно применить метод фазочувствителыюй регистрации фшуорео 1 ценции. Удобно использовать растворы, содержащие только один из флуоресцирующих компонентов; тогда можно выбрать фазовый угол детектора, отличающийся по фазе на 90° от испускания частиц этого вида, Это эквивалентно тому, что мы знаем время затухания для одного компонента и подбираем фазовый угол детектора, чтобы он находился в противофазе с этим временем затухания или фазовым углом, В рассматриваемом примере, исходя из раствора индола, подобрали фазу детектора так, чтобы он находился в противофазе с этой спектральной компонентой. Далее было обнаружено, что фазочувствитвльный спектр смеси в точности совпадает со стационарным спектром DMI (рис. 4.3). Наоборот, когда была выбрана фаза детектора, находящаяся в противофазе с испусканием DMI , было найдено, что фазочувствительный спектр смеси совпадает со стационарным спектром индола. При описанной выше методике использовали фазы индивидуальных соединений, чтобы подавить каждое из испусканий. Другой способ -регистрация стационарных спектров индивидуальных соедипеиий. В этом случае следовало бы анализировать фазочувствительные спектры, полученные при нескольких значениях фазового угла детектора, и выбрать тот фазовый угол, при котором наблюдается совпадение с нужным стационарным спектром. В любом случае фазовые углы, выбранные для подавления флуоресценции тех или иных частиц,можно использовать для расчета затухания флуоресценции тех частиц, испускание которых подавлено. Например, при частоте модуляции 10 МГц фазовый угол, соответствующий времени затухания 2,5 не для DMI , равен 8,9°. Когда фазовый детектор смещен от этого значения примерно на 90°(9,7° + 90°), испускание DMI подавлено и фазочувствительный спектр представляет собой спектр индола,..Наоборот, фазочувствительный шектр смеси подобен стационарному спектру DM1 в том случае, когда фазовый детектор смещен на 90° по отношению к фазовому углу индола (28,6° - 90°). Этот фазовый угол соответствует подавлению флуоресценции соединения, имеющего время затухания 9 не, что при таких условиях равно времени затухания индола.
Важно понимать, что на данном этапе развития метод ФЧРФ с одной частотой модуляции нельзя применять для определения обоих спектров и времен затухания флуоресценции компонентов в двухкомпонентиой смеси.
У, НС
¦Индол 9,0 29,5
¦Диметил-индол 2,5 8,9
'Рассчитано из т
Ю МГц
3,7 + 90 28,6 - 90 Фазовый угол
детектора, град
ПоВаЗление сразы
880
его зео
Длина Волны, нм
400
РИС. 4.3. Стационарные и фазочувствительные спектры испускания индола, диметилиндола и их смеси (по данным [ 2]).
Использованы растворы в додекане(20 °С ), из которых пропусканием азота удален растворенный кислород.
Для полного разделения спектров в такой смеси необходимо из дополнительных независимых измерений знать либо один из спектров испускания, либо одно из времен затухания. Несмотря на это ограничение, метод ФЧРФ может оказаться весьма полезным для установления гетерогенности испускания данного образца, даже если индивидуальные спектры или времена затухания неизвестны и не разделены однозначно. Для решения подобной задачи записывают фазочувствительные спектры при различных фазовых углах. Время затухания для каждого отдельно взятого соединёния обычно не зависит от длины волны испускания. Безусловно, существуют исключения для вязких растворов, для реакций в возбужденных состояниях и даже для чистых соединений. Для флуорофоров, имеющих единственное не зависящее от длины волны время затухания флуоресценции, можно ожидать,, что распределение интенсивности в фазочувствительных спектрах не б.удет
Фазачувстбительная флуоресценция
00
1
и
со
Длина Волны, нм
РИС. 4.4. Фазочувствительные спектры испускания индола и диметилиндола [ 2].
ФазочуВстВитетная дэлуоресценция
320
360 280
Длина Волны, нм
320
360
Рис. 4.5. Фазочувствительные спектры испускания смеси индола и диметипиндопа [2].
зависеть от фазового угла детектора <pD. Это может быть связано с тем, что испускание на каждой длине волны имеет одинаковый фазовый угол и, таким образом, полный спектр испускания изменяется с <pD согласно уравнению (4.4). Такая картина наблюдалась для растворов и индола, и DMI (рис. 4.4). Конечно, интенсивность в фазочувствительном спектре меняется как cos (<pD ~<рг), но анализ спектра показывает, что его форма и положение максимумов испускания (см. рис. 4.6) не зависят от <pD. Наоборот, при исследовании смеси флуорофоров обнаружено, что фазочувствительные спектры зависят от фазовых углов детекторов. Это показано на рис. 4.5 для смеси иидола и DMI . Максимумы фазочувствительных спектров находились при 320 и 310 нм для фазовых углов детектора, равных соответственно 165 и 120°. На рис. 4.6 приведена зависимость положения максимумов фазочувствительных спектров от фазового угла детектора. Явная зависимость положения максимумов испускания от фазы детектора для смеси и отсутствие такой зависимости для индивидуальных соединений может служить критерием для распознавания гомогенных и гетерогенных образцов.
Предыдущая << 1 .. 38 39 40 41 42 43 < 44 > 45 46 47 48 49 50 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама