Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 45

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 185 >> Следующая

Разделение спектров методов ФЧРФ основано на различии времен затухания флуоресценции двух компонентов. Интересно оценить, каково должно быть это различие для того, чтобы можно было провести достаточно хорошее разделение спектров.'Возможность применения этого метода для разделения компонентов с примерно одинаковыми временами затухания показана на примере смеси производных триптофана и тирозина В качестве последних служили N-dnemjbГгТирозинамид (NATrA) и N-ацетил-L-триптофанамид (NATpA). Анализ такого образца методом ФЧРФ является трудной, задачей, поскольку его необходимо возбуждать ультрафиолетом и особенно потому, что соединения имеют сходные времена затухания флуоресценции, различающиеся лишь на 1 не. Фазочувствительные спектры смеси NATrA и NATpA приведены на рис. 4.7. На нижней части рисунка изображены стационарные спектры NATrA и Л \ТрА, из рассмотрения которым видно, что спектр может совпадать со стационарным спектром производного триптофана, когда фазовый угол детектора равен 109°. При таком угле подавлено испускание тирозина. Мож-
Димегтшлиндол
РИС. 4.6. Определение гетерогенной флуоресценции по положению максимумов фазочувствительных спектров флуоресценции [ 2].
U 90 180 270 360
д 2Г 30 МГц
Фазовый угол детектора, град
Длина волнь/, нм
РИС. 4.7. Разделение флуоресценции тирозина и триптофана методом фазочув* ствительной регистрации флуоресценции [г].
Растворы содержали 0,025 М трис-хлорида, pH 7,5; 20 °С. Длина волны возбуждения 280 нм. Оптические плотности NATr А и NATpA в смеси 0,42 и 0,10 соответственно.
но подсчитать, что для этого компонента время затухания будет равно 1,8 не. Когда жеф0 = 121°, фазочувствительный спектр аналогичен стационарному спектру тирозина. Время затухания для соединения, флуоресценция которого при таком фазовом угле подавлена, равно 3,2 не. Рассчитанные значения времен затухания флуоресценции хорошо совладают с непосредственно измеренными для NATr А (1,8 не) и NATpA (2,9 не).
В качестве последнего примера разделения гетерогенной флуоресценции методом ФЧРФ приведем случай прямой здаиеи спектров смеси дибензо-[ с, ?]карбаэола (DBQ и дибензо[«, Н1 аитраиена (DBA) рис. 4.8). Спектры испускания каждого из этих соединений сильно структурированы и имеют рад различных максимумов испускания. При непосредственной записи спектра смеси эти максимумы еще видны. Данным примером мы хотим показать, что разрешение но длинам волн, которое можно получить методом ФЧРФ, по существу идентично разрешению, получаемому при использовании методов стационарного состояния. Кроме того, он дает возможность сравнить метод ФЧРФ с импульсной флуорометрией, Для разрешения индивидуальных спектров с помощью последнего метода потребовалось бы провести измерения кривых затухания флуоресценции при каждой выбранной длиие волны испускания. Естественно, что для этого требуются большие затраты рабочего времени. Напротив, скорость записи фазочувствительного спектра примерно та же, что и
Длит даты, нм
РИС. 4.8. Стационарные спектры и спектры, полученные подавлением фазы, для смеси дибензо[ с, 0]карбазола и дибензо[ и, hi .антрацена.
(С разрешения авторов работы [ 1] и Rlaevicr Biomedical Press.)
стационарного спектра. Для пблноты описания отметим также, что недавние исследования в области импульсной флуорометрии привели к значительно более быстрому разделению на отдельные спектральные компоненты на основе индивидуальных значений времен затухания [ 3].
4.3. Перспективы применения метода ФЧРФ для разделения
гетерогенной флуоресценции
Поскольку применение метода ФЧРФ находится еще на самом начальном этапе, нам представляется очень важным суммировать все его потенциальные возможности и ограничения. Приведенные выше результаты были получены без усреднения сигнала, а интенсивность испускания без какой-либо необходимости была уменьшена в семь раз. Обычно отношение сигнал/шум в фазочувствительных спектрах превышает то, которое показано на рис. 4.3 и 4.8. Из анализа степени совпадения фазочувствительных спектров со спектрами стационарной флуоресценции отдельных компонентов ясно, что времена затухания необходимо определять с точностью ±0,1 не [1]. Безусловно, для этого надо знать и стационарный спектр каждого компонента. Потенциальное разрешение по временам затухания вместе с разрешением по длинам волн, сравнимым с разрешением в стационарных спектрах, должно обеспечить регистрацию небольших изменений в значениях времен затухания или квантовых выходов флуоресценции компонентов. Такая чувствительность должна свидетельствовать о ценности данного метода для анализа любого образца с гетерогенным испусканием.
Существующие в настоящее время фазовые флуорометры работают только на фиксированных частотах модуляции. При этом ограничении кажется маловероятным успешное проведение анализа смесей, состоящих более чем из двух компонентов. Поэтому особенно многообещающим является комбинация фазочувствительного детектора флуоресценции с фазовым флуорометром с изменяемой частотой модуляции. Уже создано несколько приборов с изменяемой частотой ([ 4}; Греттон, частное сообщение), и, по-видимому, не существует каких-либо технических трудностей, которые бы помешали присоединить к такому флуорометру фазочувствительный детектор.
Предыдущая << 1 .. 39 40 41 42 43 44 < 45 > 46 47 48 49 50 51 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама