Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 46

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 40 41 42 43 44 45 < 46 > 47 48 49 50 51 52 .. 185 >> Следующая

Интересно также сравнить метод ФЧРФ с другим, импульсным методом получения мгновенных спектров испускания (МСИ) [ 5, б]. При использовании МСИ образец возбуждают коротким импульсом света, затем записывают спектры через определенные заданные промежутки времени после момента возбуждения. Техника мгновенных спектров флуоресценции обладает огромными потенциальными возможностями и имеет большое практическое значение, и мы здесь не будем сравнивать эти методы. Однако одно преимущество метода ФЧРФ заслуживает упоминания. В методе МСИ в любой момент времени оба флуорофора дают вклад в испускание. Можно выбрать некоторый интервал времени для частичного выделения флуоресценции любого из флуорофоров, но с помощью такой методики полностью провести разделение
спектров невозможно. Более того, разделить спектры таким образом оказывается еще труднее, когда времена затухания флуорофоров становятся сравнимыми. Напротив, с помощью метода ФЧРФ можно почти полностью подавить испускание одного из компонентов. Кроме того, легко провести разделение спектров флуорофоров, имеющих близкие времена затухания флуоресценции, что было показано на примере спектров испускания производных тирозина и триптофана (см. рис. 4.7), В настоящее время разделение спектров методом ФЧРФ проводится гораздо быстрее, и мало вероятно, что это преимущество данного метода в будущем исчезнет, так как оно связано с высокой циклической производительностью фазовых измерений по сравнению с импульсными. В методе ФЧРФ данные получают почти непрерывно. Напротив, в методе МОИ большая доля полного рабочего времени уходит на ожидание прихода фотона. Новые методы анализа кривых затухания [ 3] могут уменьшить время, необходимое для исследования гетерогенных в основном состоянии образцов.
В конечном счете разрешение по длинам волн и по временам затухания флуоресценции, которое можно получить методом ФЧРФ, по-видимому, не ограничивается только возможностями прибора, а связано главным образом с гетерогенными свойствами самих флуорофоров. Например, даже в белках, содержащих единственный триптофановый остаток, времена затухания зависят от длины волны испускания [7]. Более того, другие авто-рьиотмечали, что затухание флуоресценции триптофана и белков описывается многоэкспоненциальным законом [8 - 10]. Различия во временах затухания, полученных при разных длинах волн наблюдения (~ 1 не), превышают разрешающую силу метода ФЧРФ (< 1 не). Эта внутренняя гетерогенность, вероятно, и является главным препятствием, мешающим разрешить гетерогенную флуоресценцию белков методом ФЧРФ. Однако в равной степени очевидно, что этот метод упростит анализ такого сложного испускания.
И наконец, метод ФЧРФ, вероятно, принесет большую пользу при анализе связывания лигандов с биологическими макромолекулами или фактически при анализе любого равновесия между двумя состояниями. Спектральные свойства флуорофоров часто изменяются при связывании или при изменении природы окружения. Высокая чувствительность флуоресцентных методов позволяе/г изучать флуорофоры в разбавленных растворах, которые необходимы при измерениях больших констант ассоциации. Польза метода ФЧРФ для таких исследований очевидна [ 11]. В общем случае при связывании флуорофоров с макромолекулами изменяются времена затухания флуоресценции. Флуоресценцию лигандов, находящихся в свободном и в связанном состоянии, можно либо раздельно регистрировать, либо, наоборот, подавлять, выбрав определенный фазовый угол детектора. В подобных исследованиях можно использовать контрольный образец, представляющий собой либо несвязанный, либо полностью связанный флуорофор. С его по-
мощью подбирают фазу детектора таким образом, чтобы подавить испускание одной из форм, В этом случае интенсивность фазочувствительной флуоресценции пропорциональна концентрации флуорофора, флуоресценция которого не подавлена.
Задачи
4-1 а На рис. 4.9 изображены спектры стационарной флуоресценции TNS , PRODAN и смеси этих двух флуорофоров. Фазочувствительные спектры смеси совпадают со стационарными спектрами чистых соединений (рис. 4.10) при указанных значениях фазовых углов детектора, которые приведены по отношению к фазе падающего света. Рассчитайте времена затухания флуоресценции TNS и PRODAN.
4-2. 'Предположим, что флуоресцентный зонд 1-диметиламино-5-нафталин-супьфоновая кислота (DNS) связан с молекулой сывороточного альбумина (BSA). Предположим далее, что квантовый выход флуоресценции DNS увеличивается при связывании в два раза и что времена затухания для свободной и связанной форм равны сортветственно 5 и 10 не. Используйте следующие данные для расчета процентного содержания свободной DN5 и связанной с молекулой альбумина в случае, последнего из указанных ниже растворов:
РИС. 4.9. Стационарные спектры TNS, PRODAN и их смеои.
(С разрешения авторов работы [ 1] И Elsevier Biomedical Press.)
Длина волнь?, нм
РИС. 4.10. Фазочувствительные спектры смеси TN5 и PRO DAN. (С разрешения авторов работы [ 1 ] И Elsevier Biomedical Press.)
Интенсивность фазочувствительной флуоресценции при Образец <PD = 17,4° + 90° срр = 32.1 ° - 90°
Предыдущая << 1 .. 40 41 42 43 44 45 < 46 > 47 48 49 50 51 52 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама