Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 47

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 41 42 43 44 45 46 < 47 > 48 49 50 51 52 53 .. 185 >> Следующая

DNS(10~BM) 0 1,0
DNS (10-6 М) + избыток BSA' 1,776 0
DNS (10~в М) + Ю^М BSA 0,886 0,50
Частота модуляции равна 10 МГц. Объясните также разницу в интенсивностях для первых двух растворов.
ГЛАВА5. Поляризация флуоресценции
При возбуждении поляризованным светом испускание флуоресцирующего образца также поляризовано. Поляризация является результатом фотоотбора флуорофоров в соответствии с их ориентацией по отношению к направлению поляризованного возбуждения. Испускание может быть деполяризовано по ряду причин, относительная важность которых зависит от исследуемого образца. Вращательная диффузия флуорофоров - одна из общих причин деполяризации. Измерения поляризации или анизотропии выявляют среднее угловое смещение флуорофора, которое происходит между поглощением и последующим испусканием фотона. Оно зависит от скорости и степени вращательной диффузии за время жизни возбужденного состояния. Диффузионные движения в свою очередь зависят от вязкости растворителя и размеров и формы диффундирующих частиц Например, для флуорофора, находящегося в растворе, скорость вращения зависит от вязкого сцепления, накладываемого на флуорофор растворителем. В результате изменение вязкости растворителя будет приводить к изменению анизотропии флуоресценции. Обнаружение зависимости анизотропии флуоресценции от вращательной диффузии привело к многочисленным применениям этого метода в биохимических исследованиях. В качестве примера отметим, что измерение анизотропии флуоресценции использовалось для количественной оценки денатурации и реакций ассоциации белков с лигандами, изучения скорости вращения белков. Кроме того, на основе анизотропии мембранно-связан- ' ных флуорофоров были установлены внутренняя вязкость мембран и влияние состава мембран на их фазовые переходы.
В этой главе будут описаны основы теории стационарных измерений анизотропии флуоресценции и приведены избранные примеры применения метода в биохимии. В следующей главе мы рассмотрим теорию и применение кинетических измерений анизотропии флуоресценции.
5.1. Определения поляризации и анизотропии
Принцип измерения поляризации флуоресценции или анизотропии иллюстрирует рис. 5.1. Образец возбуждается вертикально поляризованным светом, причем электрический вектор возбуждающего пучка ориентирован параллельно оси z* Затем измеряется интенсивность испускания через поляри-
z
Источник света —
7
/
Детектор
РИС. 5.1. Схема измерения анизотропии флуоресценции.
затор. Когда регистрирующий поляризатор ориентирован параллельно (||) направлению поляризованного возбуждения, то регистрируется интенсивность /п . И наоборот, когда поляризатор перпендикулярен (1) к возбуждению, интенсивность называется /jl. Предполагается, что эти интенсивности могут быть измерены без помех, вызываемых поляризационными свойствами оптических компонент, в особенности монохроматора испускания (гл. 2).
В разд. 5.4 будут приведены методы корректировки для этой задачи. Поляризация Р и анизотропия г определяются следующим образом:
Поляризация и анизотропйя могут быть взаимозаменены при использовании выражений
Для полностью поляризованного света = 0 и Р = г =1 (это значение обычно получают для(рассеяшиого светг$. Значение Рили г, равное единице, никогда не получается для флуорофоров в растворе; измеряемые значения обычно меньше из-за зависимости фотоотбора от угла\(разд. 5.2). Для естественного или неполяризованного света /ц = 1± и Р = г = 0. Однако важно отметить, что Риг не равны между собой для промежуточных значений.
(5.3), (5.4)
В ранних работах чаще приводились значения поляризации, но в настоящее время возрастает использование анизотропии. Использование анизотропии предпочтительнее, поскольку большинство теоретических выражений в этом случае значительно проще. Это было впервые отмечено Александром Яблонским L1J. Как пример такого упрощения рассмотрим смесь флуорофоров, каждый из которых имеет поляризацию Pi и долю от общей интенсивности флуоресценции fi ш Поляризация для смеси Р дается выражением [ 2]
В противоположность этому средняя анизотропия г определяется как
где г{ - анизотропия индивидуальных форм. Ясно, что последнее выражение предпочтительнее. Более того, затухание анизотропии флуоресценции [г (*)1 сферы после импульсного возбуждения/записывается в виде
где г0 - анизотропия в момент t = 0; ср - время вращательной корреляции сферы. Затухание поляризации ие подчиняется одноэкспоненциальному закону даже для сферической молекулы.
ПРОИСХОЖДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЙ ПОЛЯРИЗАЦИИ и анизотропии. Может вызвать удивление, почему для одного и того же явления существуют две широко используемые меры. КакР, так и г имеют рациональное происхождение. Рассмотрим частично поляризованный свет, направленный вдоль оси х (рис. 5.2) и предположим, что измеряют интенсивности 1г и 1у детектором, ориентированным вдоль оси х. Поляризация этого света определяется как доля света, который поляризован линейно. Иначе говоря,
Предыдущая << 1 .. 41 42 43 44 45 46 < 47 > 48 49 50 51 52 53 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама