Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 52

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 46 47 48 49 50 51 < 52 > 53 54 55 56 57 58 .. 185 >> Следующая

5А. 1. Однолучевой метод, мли L-формат
Этот метод используется наиболее часто, так как большинство флуорм-метров имеет только один эмиссионный канал. Рассмотрим схематическую диаграмму, приведенную на рис. 5.8. Напомним, что длины воли воз-
РИС. 5.8. Схематическая диаграмма измерения анизотропии флуоресценции однолучевым методом.
М - монохроматор.
буждения и испускания обычно варьируют с помощью монохроматоров. Монохроматор возбуждения частично поляризует падающий свет. В результате вращение поляризатора возбуждения в горизонтальное (Г) или вертикальное (В) положение дает разную интенсивность падающего света, даже если источник излучает иеполяризованный свет. Подобно этому, монохроматор эмиссии имеет различную эффективность пропускания для вертикально и горизонтально поляризованного света. Следовательно, вращение поляризатора испускания изменяет эффективную чувствительность канала испускания. Таким образом, измеряемые интенсивности — это не искомые параллельные и перпендикулярные составляющие. Целью является измерение действительных интенсивностей /ц и 7^ , независимых от детектирующей системы.
Для указания ориентации поляризаторов возбуждения и испускания будем использовать два индекса. Например, /г в соответствует горизонталь-
но поляризованному возбуждению и вертикально поляризованному испусканию. Эти обозначения легко запомнить, так как индексы располагаются в том же порядке, в котором свет проходит через два поляризатора. Пусть Sg и Sr - чувствительности канала испускания к вертикально и горизонтально поляризованным составляющим соответственно. Для вертикально поляризованного возбуждения наблюдаемые поляризованные интенсивности будут следующими:
IBBmkSBh\: lBr~kSrk (5.27), (5.28)
где k - коэффициент пропорциональности, учитывающий квантовый выход флуорофора и другие инструментальные факторы. Деление (5.27) на (5.28) дает
^ вв sBh\
= G---------- (5.29)
7вг srk К
Для того чтобы вычислить действительное отношение интенсивностей (1\\ /1\), необходимо определить G-фактор, который представляет собой отношение чувствительностей детектирующей системы для вертикально и горизонтально поляризованного света:
G = Sg/Sr (5.30)
Пусть, например, G = 1,9. Это означает, что монохроматор испускания пропускает вертикально поляризованный свет при выбранной длине волны в 1,9 раза эффективнее, чем горизонтально поляризованный свет. Важно отметить, что G-фактор зависит от длины волны испускания и в определенной степени от полосы пропускания монохроматора. Часто измерения анизотропии проводят, используя на испускании фильтр, а не монохроматор. Для простоты мы полагаем, что к поляризации чувствителен только монохроматор, но в общем случае это не так. Фильтры обычно не оказывают заметного поляризационного влияния, и, таким образом, следует ожидать G = 1,0. Тем не менее этот фактор нужно всегда определять, так как при вращении поляризатора испускания может смещаться положение фокусированного изображения флуоресценции, изменяя кажущуюся чувствительность.
G -фактор легко измерять, используя горизонтально поляризованное возбуждение, когда и горизонтально, и вертикально поляризованные компоненты пропорциональны 1± (рис. 5.8). Эго происходит потому, что обе ориентации перпендикулярны к поляризации возбуждения. Таким образом, любое измеряемое различие между /гв и /гг должно определяться свойствами детектирующей системы как
ГГВ
'гг Sr/jL
То, что интенсивность возбуждения изменится при вращении поляризатора возбуждения в горизонтальное положение, ие имеет значения* Это изменение - постоянный множитель в числителе и знаменателе уравнения (6.31) и, следовательно, сокращается. Когда известен G-фактор, отношение /и / /А может быть вычислено при использовании следующего уравнения:
^ВВ 1 Zll
------ - ---- (5.32)
G h
Анизотропия дается выражением
(f||//i) + 2. которое час?о используется в другом виде:
/вв -G/Br
г ----------------
*вв + 2GJBr
(5.33)
(5.34)
5.4.2. Двухлучевой метод, (или Т-формат
В двухлучевом методе одновременно измеряют интенсивность параллельной и перпендикулярной составляющих с использованием двух отдельных систем регистраций (рис. 5.9). Поляризаторы испускания остаются в неизменном положении, следовательно, нет необходимости измерять относительную интенсивность для каждого поляризатора. Однако необходимо измерение относительной чувствительности двух детектирующих систем, что выполняется с использованием горизонтально поляризованного возбуждения. Измерения проводят следующим образом. Поляризатор возбуждения сначала ставят в вертикальное положение и измеряют отношение параллельных и перпендикулярных сигналов RB, которое определяется как
Предыдущая << 1 .. 46 47 48 49 50 51 < 52 > 53 54 55 56 57 58 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама