Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 54

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 48 49 50 51 52 53 < 54 > 55 56 57 58 59 60 .. 185 >> Следующая

В гл. 2 было показано, что эффективность монохроматоров зависит от поляризации света. Следовательно, обычно наблюдается не /обЩ|, а некоторая комбинация /ц и При использовании поляризаторов измеренная интенсивность может быть равна /ц + безотносительно к степени поляризации образца. Для того чтобы достичь этого, поляризатор возбуждения ориентируют в вертикальном положении, а поляризатор испускания - на .
54,7° от вертикали. Так как cos 2 54,7° = 0,333, a sin254,7°= 0,667, то такая установка поляризаторов приводит к увеличению в два раза по сравнению с /п , давая, таким образом, корректную сумму для /общ.
5.5„ Внешние причины деполяризации флуоресценции
В предыдущем обсуждении мы коснулись главным образом внутренней деполяризации, которая является результатом углового смещения между диполями поглощения и испускания. Предполагалось, что флуорофоры неподвижны и возбужденное состояние остается локализованным на первоначально возбужденном флуорофоре. Внешние причины деполяризации - это те, которые действуют в течение времени жизни возбужденного состояния [ 3]: вращательная диффузия флуорофоров и безызлучательный перенос энергии между флуорофорами (гл. 10). Оба процесса приводят к дополнительному угловому смещению осциллятора испускания и, следовательно, к понижению анизотропии.
Влияния вращательной диффузии и переноса энергии легко разделяются рациональным выбором экспериментальных условий. Например, броуновское вращение вызывает пренебрежимо малую деполяризацию, когда скорость вращения значительно меньше скорости испускания флуоресценции. Это иллюстрируется уравнением Перрена:
где т - время затухания флуоресценции; <р - время вращательной корреляции. Ясно, что, когда <р » т, наблюдаемая анизотропия равна г0.
Безызлучательный перенос энергии происходит только в концентрированных растворах, где среднее расстояние между молекулами флуоро-фора сравнимо с характеристическим радиусом R0, который обычно составляет ~ 50 А. Можно легко вычислить, что для получения такого среднего расстояния необходима концентрация порядка 0,013 М*. Эта концентрация значительно больше, чем обычно необходимо для флуоресцентных измерений (10-6 М). Таким образом, безызлучательный перенос энергии легко исключается при использовании разбавленных растворов. Внешние причины деполяризации флуоресценции объединены в табл. 5.2, составленной по данным Вебера [ 3].
Вероятно, из условий, указанных в табл. 5.2, наиболее интересны разбавленные невязкие растворы, в которых анизотропия обусловлена главным образом вращательным движением флуорофора. Для маркированных
Таблица 5.2. Внешние причины деполяризации [з]
Условия Результат Определяющий фактор
наблюдения на молекулярном уррене
Разбавленный вязкий раствор (пропиленгликоль;
-70 °С)
Концентрированный вязкий раствор
Разбавленный невязкий раствор (Н2С), спирт; комнатная температура)
г0 или cos а [ уравнение (5.20)]
О < | г | < | г01, анизотропия уменьшается за счет миграции энергии
0< |г|<|г0|, анизотропия уменьшается из-за броуновского вращения
Угол между диполями поглощения и испускания как функция длины волны возбуждения
Зависящий от расстояния безызлучательный перенос энергии
Размеры и форма молекул флуорофора
* Такая оценка не учитывает наличие распределения по расстояниям и возможность диффузии молекул за время жизни возбужденного состояния. Фактически* чтобы наверняка избежать процессов переноса энергии, необходимо использовать концентрации менее 10-"4 М„ — Прим,, ред„
белков это движение определяется наряду с другими факторами,размерами, формой и степенью агрегации белка. Для мембран анизотропия зависит от химического состава и фазового состояния мембраны. Использование такого типа зависимостей будет обсуждено в разд. 5.7.
тривиальные ПРИЧИНЫ деполяризации. К таким причинам относятся рассеяние света, реабсорбция и разъюстировка поляризаторов. Это, конечно, нетривиальные экспериментальные проблемы, но указанные эффекты зависят от оптических условий эксперимента и не дают полезной информации о молекулярных свойствах или динамике исследуемого флуорофора.
Биологические образцы, такие, как водные суспензии мембран, часто бывают мутными. Мутность приводит к рассеянию как падающего света, так и испускаемых фотонов. Рассеяние падающего света может сказываться на возбуждении, а излученные фотоны могут рассеиваться до наблюдения. Считается, что каждый акт рассеяния снижает анизотропию рассеянных фотонов до 0,7 первоначального значения [ 6] и что из-за мутности наблюдаемая анизотропия (г ') уменьшается линейно в зависимости от оптической плотности D:
г ' =г -г . 2,303D (5.39)
В этом уравнении г — анизотропия, не возмущенная рассеянием. Недавние исследования подтвердили предсказываемую линейную зависимость г'от мутности [7]. Однако истинная константа пропорциональности индивидуальна для каждого исследуемого образца. Поэтому целесообразно изучать влияние мутности для каждого образца. Это обычно достигается разбавлением. Если при разбавлении изменение анизотропии пренебрежимо мало, то маловероятно, что имеется существенная деполяризация, вызванная рассеянием.
Предыдущая << 1 .. 48 49 50 51 52 53 < 54 > 55 56 57 58 59 60 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама