Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 57

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 51 52 53 54 55 56 < 57 > 58 59 60 61 62 63 .. 185 >> Следующая

5„7„1„ О.ценка микровязкости клеточных мембран
В предыдущем разделе указывалось, что анизотропия флуоресценции сильно зависит от вязкости раствора, в котором растворен флуорофор. Именно эта зависимость привела к использованию измерения анизотропии для оценки микровязкости в области ацильных боковых цепей клеточных мембран. Выбирают флуорофор, который распределяется в такое неполярное окружение. Как правило, для этой цели служат пер ил он, 9-винил антрацен, 2-метилантрацен [4, 12] и дифенилгексатриеп [13]. Последнее из указанных веществ наиболее широко используется в настоящее время по соображениям, которые будут обсуждены ниже. Первоначально выбирают подходящий растворитель сравнения и строят градуировочную кривую ~ зависимость измеренных значений анизотропии флуоресценции от известной вязкости растворителя сравнения. Типичная градуировочная кривая приведена на рис. 5.11.
Ю^'Тг/ц, грае?-с/U
РИС. 5.11. Градуировочная кривая для оценки микровязкости мембран [12].
Приведены данные по анизотропии перилена (7), 2-метилантрацена (2) и 9-винилантрацена (3) в минеральном масле.
Затем измеряют анизотропию флуоресценции для того же флуорофора, распределенного в области ацильных боковых цепей липидного бислоя. Внутренняя вязкость бислоя оценивается при сравнении с градуировочной кривой. Для малых ароматических молекул, по-видимому, наиболее вероятно то, что их эффективный молекулярный объем V будет один и тот же в растворителе и в липидном бислое. В результате градуировочная кривая зависимости г от т) в растворителе известной вязкости позволяет связать анизотропию мембранно-связанного флуорофора с микровязкостью мембраны.
Типичные результаты по микровязкости, полученные при использовании перилена, показаны на рис. 5.12. Яичный фосфатидилхолин представляет собой смесь ненасыщенных фосфолипидов, которые не претерпевают фазовых переходов в изученном температурном диапазоне. Кажущаяся микровязкость низка (кривая 2) и монотонно возрастает с изменением К~1. Ди~
РИС. 5.12. Результаты определения микровязкости диспергированных фосфоли-пидных мембран по измерению анизотропии перилена [12].
Приведены кажущиеся микровязкости для дипапьмитоипфосфатидилхопина (7), яичного фосфатидилхолина (2) и смесей DPPC + холестерин (3, 4), для которых указаны молярные соотношения.
пальмитоилфосфатидилхолии - насыщенный фосфолипид, фазовый переход которого отражается о резком уменьшении микровязкости, наблюдаемом вблизи 37 °С (кривая 1), Ниже температуры перехода липидные бислои, состоящие из насыщенных липидов, должны быть довольно вязкими. Па рис. 5.12 также показана кажущаяся микровязкость смесей DFPC + холестерин (кривые 3, 4). Холестерин обычно увеличивает кажущуюся микровязкость мембран. Для определения микро вяз костей, приведенных на рис» 5.11 для всех трех флуорофоров, в качестве растворителя сравнения было применено минеральное масло. Эквивалентные микровязкости были получены для каждой из этих систем, что увеличивает достоверность яолученных значений. Однако было бы более желательно использовать три разных растворителя сравнения, чем изучать три разные системы, так как в этом случае эксперименты выявили бы связь между скоростью вращения флуорофоров и макроскопической вязкостью растворителей [ 14].
После этих начальных наблюдений измерения анизотропии флуоресценции стали широко использоваться для исследования динамики мембран. Некоторые благоприятные характеристики метода, а именно относительно простая теоретическая основа, несложное и сравнительно недорогое оборудование и высокая чувствительность измерений, способствовали его широкому распространению. Благодаря высокой чувствительности появилась возможность проведения экспериментов в разбавленных суспензиях мембран, содержащих только следовые количества зондов. Типичное молярное соотношение липид/зонд находится в диапазоне 200 ¦: 1 - 2000 ¦: 1, а типичная концентрация липидов составляет 0,1 - 10 мг/мл.
Па протяжении последнего десятилетия наиболее широкоиспользуемым зондом для оценки вязкости мембран был ВРИ. Это, по-видимому, вызвано несколькими причинами. У ВРИ высокий коэффициент экстинкции (~80000 М-1 . см"1), что позволяет исследовать разбавленные растворы, а предельная анизотропия постоянна в диапазоне 320 - 380 нм, что определяет выбор длины волны возбуждения. Деполяризационные вращения ВРИ, по-видимому, изотропны. Вращение вокруг длинной оси молекулы может быть быстрым, но оно не смещает момента перехода, и, следовательно, такое вращение неактивно в деполяризации. (Искривления, заметные на рис. 5.11 для других зондов, происходят частично из-за анизотропных вращений несимметричных молекул.) И наконец, отчетливо проявляются фаг зовые переходы мембран. Этот факт иллюстрирует рис. 5.13, на котором приведены мисаровязкости, определенные с помощью DPH, для фосфолипидных везикул различного химического состава [ 15]. Из полученных данных видно, что кажущаяся микровязкость бислоев сильно зависит от их фазового состояния. Интересно отметить, что с другими флуорофорами, такими, как 12-антроилоксистеарат, 1-анилино-8-нафталипсульфоиат, М-фенил-1-иафтил-амин. перил ей и 9-вииилантрацен, наблюдаются менее резкие изменения.
Предыдущая << 1 .. 51 52 53 54 55 56 < 57 > 58 59 60 61 62 63 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама