Главное меню
Главная О сайте Добавить материалы на сайт Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Аналитическая химия Ароматерапия Биотехнология Биохимия Высокомолекулярная химия Геохимия Гидрохимия Древесина и продукты ее переработки Другое Журналы История химии Каталитическая химия Квантовая химия Лабораторная техника Лекарственные средства Металлургия Молекулярная химия Неорганическая химия Органическая химия Органические синтезы Парфюмерия Пищевые производства Промышленные производства Резиновое и каучуковое производство Синтез органики Справочники Токсикология Фармацевтика Физическая химия Химия материалов Хроматография Экологическая химия Эксперементальная химия Электрохимия Энергетическая химия
Новые книги
Сидельковская Ф.П. "Химия N-вннилпирролидона и его полимеров" ()

Сеидов Н.М. "Новые синтетические каучуки на основе этилена и олефинов" (Высокомолекулярная химия)

Райт П. "Полиуретановые эластомеры" (Высокомолекулярная химия)

Попова Л.А. "Производство карбамидного утеплителя заливочного типа" (Высокомолекулярная химия)

Поляков А.В "Полиэтилен высокого давления. Научно-технические основы промышленного синтеза" (Высокомолекулярная химия)
Книги по химии
booksonchemistry.com -> Добавить материалы на сайт -> Другое -> Лакович Дж. -> "Основы флуоресцентной спектроскопии" -> 59

Основы флуоресцентной спектроскопии - Лакович Дж.

Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии — М.: Мир, 1986. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): osnovifluriscentnoyspektroskopii1986.djv
Предыдущая << 1 .. 53 54 55 56 57 58 < 59 > 60 61 62 63 64 65 .. 185 >> Следующая

2
)
(5.51)
3 С08 2 Р — 1
22,0 г
2,0
2,0 4,0 В,О 8,0 ЩО
16* Tfq, К/Л
где штрихом отмечено экстраполированное значение, ар- угол, на который флуорофор свободно вращается (см. рис. 5.14). Подобным же образом сегментальные движения снижают экстраполированную анизотропию г '0ч
При очень быстром сегментальном движении (<р « т) и наклон, и отсекаемый отрезок на графике Перрена меняются. Член (1 / P'Q ~ 1/3) сокращается при расчете молекулярного объема, и вычисленное время корреляции отражает общую скорость вращения белка. Важно отметить, что если q> не намного меньше, чем т, а это часто встречается, то кажущееся время корреляции может существенно изменяться под влиянием сегментальных движений [ 19, 20].
Не следует пренебрегать информацией, получаемой из сравнения значений Р0 иРо. ЕслиРо намного меньше, чем Р0, то можно сделать вывод о существовании сегментальных движений зонда на макромолекуле. Протяженность этих движений может быть оценена при использовании уравнений
(5.51) - (5.52). Другое явление, часто встречающееся на графиках Перрена, -быстрое увеличение 1 /Р— 1/3 при высоких температурах, как это показано на рис. 5.16 для денатурации двойной спирали DNA. Увеличение i/P обычно является результатом денатурации макромолекулы, приводящей к увеличению сегментальной подвижности флуорофора.
5.7.3. Реакции ассоциации
Измерение поляризации флуоресценции или анизотропии широко используется для количественной оценки реакций ассоциации биологических макромолекул. Связывание антигена с антителом [21], ассоциация белков [22], ассоциации лигандов с белками и нуклеиновыми кислотами [23, 24]-вот только несколько примеров. Предположим, что флуорофор может находиться либо в свободном виде, либо может быть связан с макромолекулой. Наблюдаемое значение анизотропии флуоресценции, когда присутствуют обе формы, дается выражением
г ~ /свобгсвоб + /связгсвяз (5.53)
гдегсвоб Игсвяз - анизотропии свободного и связанного флуорофоров соответственно: fCBo6 и fCBnз - доли от общей флуоресценции, соответствующие каждой форме флуорофора. Естественно, /своб + f свяэ » 1. Предположим далее, что для данного случая квантовый выход флуорофора не изменяется при связывании и /своб и /С0ЯЗ соответствуют долям от общего количества флуорофора, находящегося в свободном и связанном состоянии. Этой информации достаточно для вычисления константы диссоциации реакции.
(5.52)
Рассмотрим равновесие между лигандом L и белком Р: pzzp _ I (6.54)
Константа диссоциации дли этой реакции записывается в виде
[Р][Ц /е геч
к _ 1—iL_L_ (5.55)
Л " [ Р _ I. ]
Доля связанного флуорофора равна
f [Р-Ц [Р] ..
’ TTJ- ' ТрТТТ (5-5,1)
где [Lq] « [ L] + [ Р- L] - общая концентрация лиганда или флуорофора. Уравнение (5.53) легко преобразовать к виду
f CBR3 ~ (г ~ ГСВ0б)/(ГСВЯЗ ~ ^ своб) (5.57)
В общем случае можно получить значении гсвоб и гсвнз, исследуя флуорофор в отсутствие белка и при высоких концентрациях белка, достаточных для полного связывания флуорофора, По измеренному значению г можно вычислить /свнз и /СВОб* ')ти значения затем используются для вычисления, константы связывания. Наиболее удобная форма уравнения связывания определяется спецификой анализируемого объекта.
Ценность измерения анизотропии для изучения реакций ассоциации ооо тоит в том, что нет необходимости в изменении интенсивности флуоресценции или спектра испускания флуорофора. Фактически если происходят такие изменения, то необходимо более сложное выражение для вычисления f связ и'л средних значений анизотропии. Если при связывании происходят изменения квантового выхода, анизотропия может изменяться значительно сильнее. Например, рассмотрим связывание профлавииа с DNA [ 24]. Известно, что поляризация профлавииа в воде почти равна нулю, а поляризация формы, связанной с DNA, близка к 0,37. Следовательно, даже если квантовый выход или спектр испускания профлавииа при связывании остаются постоянными, анизотропия по-прежнему может быть использована для вычисления степени связывания.
Часто квантовый выход флуорофора при связывании изменяется.
В этом случае необходимо использовать другую форму уравнения (5,57), учитывающую это изменение. Примем, что R - УСВЯЗ/ЦСВ06 - отношение квантовых выходов связанной и свободной форм. Среднее значение анизотропии связано с долой от общего количества флуорофора, находя-
Предыдущая << 1 .. 53 54 55 56 57 58 < 59 > 60 61 62 63 64 65 .. 185 >> Следующая

Авторские права © 2011 BooksOnChemistry. Все права защищены.
Реклама